上期我們介紹了藥物代謝物定量常用的方法——直接定量法。該法需要注意的兩點：第一個是一些代謝物比母體藥物更具親水性，尤其是葡萄糖醛酸，這加大了代謝物直接定量的難度，隨著液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀的出現(xiàn)，我們克服了這一問題，因此LC-MS/MS常用于在藥代動力學(xué)和代謝研究。第二個是需要合適的對照標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)來保證代謝物結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性，但代謝物標(biāo)準(zhǔn)品有的無法買到或價格比較貴。后來各類檢測器的出現(xiàn)，解決了標(biāo)準(zhǔn)品的問題。其實藥物代謝物定量除了用直接定量法外，還可以利用藥物與其代謝物之間的響應(yīng)因子進行定量。那么接下來，小編就帶大家一起看看響應(yīng)因子是如何進行定量的。
響應(yīng)因子定量法
使用響應(yīng)因子定量法的前提是藥物和所有代謝物都可以實現(xiàn)色譜分離。響應(yīng)因子定量是基于LC-MS/MS與檢測器相結(jié)合，該檢測器提供每個化合物的摩爾響應(yīng)值，通常用RAD檢測器。代謝物和母體藥物在RAD上的響應(yīng)值與在LC-MS/MS的響應(yīng)值比有關(guān)聯(lián)。樣品中的低水平的代謝物和母體藥物通過靈敏度高的LC-MS/MS進行測量，利用RAD檢測響應(yīng)因子，從而可以計算代謝物濃度。最佳分析方法是在液相色譜分離后結(jié)合RAD和MS，以便在兩個檢測器上以相同的保留時間獲得代謝物和母體藥物的峰。由于RAD的動態(tài)范圍較大，因此非常適合于此類代謝物分析，但它的使用受到放射性標(biāo)記標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的可用性的限制。
LC-MS/MS最常用的檢測器是紫外檢測器，在代謝物和母體藥物發(fā)色團具有足夠的選擇性，不受代謝的影響，代謝物與其他藥物相關(guān)物質(zhì)和內(nèi)源性化合物可以很好的分離的情況下，代謝物可使用紫外檢測器進行（半）定量分析。
這種方法在一定的標(biāo)準(zhǔn)下對代謝物定量也可能是合理的。在確定響應(yīng)因子后，根據(jù)母體藥物的標(biāo)準(zhǔn)曲線對代謝物進行定量。響應(yīng)系數(shù)必須保持恒定，因此需要定期對響應(yīng)系數(shù)進行驗證。使用相同且無故障的儀器，反應(yīng)因子在長時間內(nèi)還是非常穩(wěn)定的。
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參考資料：Roskar, Robert , and T. Trdan . Analytical Methods for Quantification of Drug Metabolites in Biological Samples. Chromatography - The Most Versatile Method of Chemical Analysis. 2012.
