什么是液相色譜LC？
液相色譜LC是一類分離技術(shù)，用于分離混合物中的各種成分，是樣品通過極性流動相和非極性固定相進(jìn)行物質(zhì)傳質(zhì)的過程。
液相色譜LC的工作原理?
注入樣品隨溶劑（即流動相）進(jìn)入填充了多孔介質(zhì)的色譜柱，多孔介質(zhì)由聚合物、二氧化硅等顆粒狀固體材料（即固定相）制成，根據(jù)樣品與固定相和流動相的相對親和力，將化合物逐個分離。其中，與固定相親和力最強的組分最后流出，保留時間最長。
液相色譜LC與高效液相色譜HPLC有何不同？
?高效液相色譜HPLC又稱高壓液相色譜，是一種先進(jìn)的液相色譜。高效液相色譜主要用于醫(yī)藥、食品等領(lǐng)域，特別適用于不能用氣相色譜分析的低揮發(fā)性或非揮發(fā)性有機化合物。
傳統(tǒng)液相色譜與高效液相色譜的區(qū)別在于，液相色譜中的溶劑是依靠重力運動的，而在高效液相色譜中，溶劑在泵的高壓下流動，克服了填料塔的壓降，縮短了分離時間。正如將要討論的，連續(xù)流動注射泵在高效液相色譜中非常有用。
高效液相色譜主要通過泵輸送溶劑，常見的泵類型有：
1. 直接氣壓系統(tǒng)：價格便宜，可靠性高，但更換溶劑困難。
2. 注射泵：可提供無脈沖連續(xù)流量，精度高，無需清洗。
3. 氣動增強器：在恒壓下工作，即任何堵塞都可能導(dǎo)致壓力下降，從而產(chǎn)生脈沖。
4. 往復(fù)泵：可提供恒定的流量和高壓，但可以引起脈沖。
樣品注射器要求死體積小，耐高壓。由于樣品進(jìn)樣閥具有這些特性，所以大多數(shù)裝置采用樣品進(jìn)樣閥而不是直接進(jìn)樣。可以使用自動取樣器將樣品自動注入閥門回路，也可以使用微型注射器手動注入。
HPLC中樣品的檢測與鑒定
化合物的鑒定與定量是通過色譜圖來確定的，通常保留時間表示x軸，然而，y軸取決于檢測方法，該方法通常是紫外檢測器并測量吸光度的強度。其他類型的檢測器也可以使用，如質(zhì)譜檢測器、蒸發(fā)光散射檢測器、熒光檢測器等。
什么是質(zhì)譜MS？
質(zhì)譜MS是根據(jù)原子或分子的質(zhì)荷比，將原子或分子電離，從而實現(xiàn)化合物的分離和檢測。質(zhì)譜在生物化學(xué)和原子物理學(xué)等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。
質(zhì)譜的工作原理
樣品被轉(zhuǎn)換成氣態(tài)（除了氣態(tài)樣品或熱不穩(wěn)定的樣品），并通過接口引入電離室；氣體樣品離子化產(chǎn)生陽離子，用質(zhì)量分析儀根據(jù)離子的質(zhì)荷比進(jìn)行分離，最后用檢測器測定每種離子的種類和數(shù)量。
注意：大多數(shù)情況下，氣體樣品離子化產(chǎn)生陽離子，但少數(shù)類型的質(zhì)譜會產(chǎn)生陰離子。
直接注入?
有時，特別是對于熱不穩(wěn)定化合物，可以在液相中直接注入樣品，這種方法叫做直接注入。在這種情況下，電離發(fā)生在冷凝階段，需要注射泵將樣品連續(xù)輸送到光譜離子源中。注射泵是最常見和最可靠的直接注入方式，也常用于質(zhì)譜MS中校準(zhǔn)溶液和基質(zhì)的輸送。
質(zhì)譜MS的局限性
質(zhì)譜是一種非常精確和高靈敏度的分離和檢測技術(shù)。然而，在分離高度復(fù)雜的混合物中所需組分時，僅利用MS不能實現(xiàn)完全分離。這是由于某些化合物可能具有類似的摩爾質(zhì)量和碎片模式。因此，將MS與HPLC相結(jié)合是一種理想的分離檢測技術(shù)。
什么是液質(zhì)聯(lián)用LC-MS？
液質(zhì)聯(lián)用LC-MS是高效液相色譜LC與質(zhì)譜MS結(jié)合的技術(shù)，兩者結(jié)合可以減少實驗誤差，提高準(zhǔn)確度，在環(huán)境廢水等涉及大量化合物的檢測分析中具有重要的應(yīng)用價值。
LC-MS的工作原理
液質(zhì)聯(lián)用LC-MS是根據(jù)混合物的物理化學(xué)性質(zhì)，分離混合物中各種組分，并通過質(zhì)譜進(jìn)行檢測。為了確保完全電離并保持質(zhì)譜的檢測靈敏度，LC-MS的流速應(yīng)小于HPLC的流速。因此，LC-MS的色譜柱要小得多，以適應(yīng)較小的溶劑流速和樣品體積。注射泵因其精確度高并可以提供非常低的流速，常用于LC-MS。此外，還可以使用注射泵將樣品注入系統(tǒng)，因為其可以提供的樣品劑量非常精確。
Q-Exactive-TM質(zhì)譜聯(lián)用儀（圖片來源：迪信泰檢測平臺）
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參考資料：Basic Principles of LC, HPLC, MS, & MS.
