- PCR：一種快速的DNA復(fù)制方法,由變性--退火(復(fù)性）--延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成。以DNA的擴(kuò)增。
- 實(shí)時(shí)熒光定量PCR（realtime fluores-cence quantitative PCR）。也就是Real-Time PCR，其最大的作用是檢測(cè)樣品中的初始DNA濃度。
real-time PCR：實(shí)時(shí)PCR(real-time PCR)屬于定量PCR（Q-PCR）的一種，以一定時(shí)間內(nèi)DNA的增幅量為基礎(chǔ)進(jìn)行DNA的定量分析。Real-timePCR與reverse transcription PCR相結(jié)合，能用微量的RNA來(lái)找出特定時(shí)間細(xì)胞組織內(nèi)的特別表達(dá)的遺傳基因。這兩種RT PCR的組合又被稱(chēng)之為定量RT-PCR（QRT-PCR）。 - RT-PCR是指逆轉(zhuǎn)錄PCR（reverse transcription），基本操作過(guò)程是將所提取的RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，然后將所獲得的cDNA作為模板，設(shè)計(jì)引物進(jìn)行擴(kuò)增，是一種檢測(cè)基因表達(dá)的常用方法。
RT-PCR，是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)的一種廣泛應(yīng)用的變形。在RT-PCR中，一條RNA鏈被逆轉(zhuǎn)錄成為互補(bǔ)DNA（cDNA），再以此為模板通過(guò)PCR進(jìn)行DNA擴(kuò)增。 - QRT-PCR在RT-PCR體系中同時(shí)加入內(nèi)參標(biāo)基因的引物，使目的基因和內(nèi)參基因在同一條件下同時(shí)擴(kuò)增。在擴(kuò)增反映結(jié)束之后，可以通過(guò)凝膠電泳的方法對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行半定量分析，但分析的是PCR終產(chǎn)物，不能準(zhǔn)確分析未經(jīng)PCR信號(hào)放大之前的起始模板量。
至于三者的關(guān)系，RT-PCR和實(shí)時(shí)定量PCR應(yīng)該都屬于PCR，在RNA實(shí)驗(yàn)中，這二者都會(huì)應(yīng)用到。例如你要比較2個(gè)組織中的某基因的表達(dá)差異，首先你要提取2個(gè)組織的總RNA，然后通過(guò)RT-PCR檢測(cè)該基因是否在2個(gè)組織中有表達(dá)，然后通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR測(cè)定該基因在2個(gè)組織中的表達(dá)量是否具有顯著性差異。
擴(kuò)展資料1：
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)是一種用于放大擴(kuò)增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，它可看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制，PCR的最大特點(diǎn)，是能將微量的DNA大幅增加。
PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）是利用DNA在體外攝氏95°高溫時(shí)變性會(huì)變成單鏈，低溫（經(jīng)常是60°C左右）時(shí)引物與單鏈按堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則結(jié)合，再調(diào)溫度至DNA聚合酶最適反應(yīng)溫度（72°C左右），DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補(bǔ)鏈?；诰酆厦钢圃斓腜CR儀實(shí)際就是一個(gè)溫控設(shè)備，能在變性溫度，復(fù)性溫度，延伸溫度之間很好地進(jìn)行控制。
擴(kuò)展資料2：
PCR原理
DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解旋成單鏈，在DNA聚合酶的參與下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子拷貝。
在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過(guò)溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，加入設(shè)計(jì)引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。
但是，DNA聚合酶在高溫時(shí)會(huì)失活，因此，每次循環(huán)都得加入新的DNA聚合酶，不僅操作煩瑣，而且價(jià)格昂貴，制約了PCR技術(shù)的應(yīng)用和發(fā)展。
耐熱DNA聚合酶-Taq酶的發(fā)現(xiàn)對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個(gè)循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷、同時(shí)也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。
PCR技術(shù)的基本原理類(lèi)似于DNA的天然復(fù)制過(guò)程，其特異性依賴(lài)于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。PCR由變性-退火-延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：
①模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時(shí)間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備；
②模板DNA與引物的退火（復(fù)性）：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合；
③引物的延伸：DNA模板-引物結(jié)合物在72℃、DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）的作用下，以dNTP為反應(yīng)原料，靶序列為模板，按堿基互補(bǔ)配對(duì)與半保留復(fù)制原理，合成一條新的與模板DNA鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈，重復(fù)循環(huán)變性-退火-延伸三過(guò)程就可獲得更多的“半保留復(fù)制鏈”，
而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個(gè)循環(huán)需2～4分鐘，2～3小時(shí)就能將待擴(kuò)目的基因擴(kuò)增放大幾百萬(wàn)倍。
