近年來(lái)，單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)越發(fā)火爆，它在揭示細(xì)胞異質(zhì)性和展示組織內(nèi)真實(shí)細(xì)胞種類(lèi)上獨(dú)有優(yōu)勢(shì)。單細(xì)胞實(shí)驗(yàn)從單細(xì)胞懸液到單細(xì)胞核懸液，從上門(mén)樣本制備到寄送樣本制備，方式已經(jīng)越來(lái)越多樣化。對(duì)于很多地區(qū)來(lái)說(shuō)，可能上門(mén)進(jìn)行樣本制備不是特別適用，對(duì)此多數(shù)都會(huì)采取寄送樣本的方式進(jìn)行制備，今天小編就寄送樣本過(guò)程需要注意的點(diǎn)進(jìn)行了小小的總結(jié)，希望對(duì)大家能有所幫助哦！

寄送樣本過(guò)程中的小小建議：

組織保存液寄送新鮮樣本（<48h）

l?組織大小≥0.2 g，常見(jiàn)腫瘤組織優(yōu)先；

l?客戶(hù)將新鮮組織樣本處理成適宜體積（建議指甲蓋大小，去除周邊不需要的組織等）后，直接放入裝有組織保存液的儲(chǔ)存管中。組織盡量無(wú)菌放入液體中，迅速蓋緊加封口膜包裝好。

l?組織樣本應(yīng)完全浸沒(méi)于組織保存液中（組織保存液用之前需2-8℃預(yù)冷）；

l?建議首次寄送時(shí)同一樣本2-3管重復(fù)，以防萬(wàn)一；

l?客戶(hù)需標(biāo)明：樣本名稱(chēng)，組織類(lèi)型，離體時(shí)間，浸入組織保存液時(shí)間；

l?冰袋寄送(注意不要選擇干冰)，裝有樣本的儲(chǔ)存管不能和冰袋直接接觸，需用泡沫包裹。務(wù)必保證在 48 小時(shí)內(nèi)到達(dá)實(shí)驗(yàn)室。

注意：組織保存液盡量在1個(gè)月內(nèi)使用，存放在4度冰箱里，不要凍存！

干冰寄送凍存細(xì)胞

l?凍存前細(xì)胞活性80%以上 ；

l?建議首次寄送時(shí)同一樣本2-3管重復(fù)，以防萬(wàn)一；

l?凍存方法：將分離的細(xì)胞放到程序降溫盒中（推薦異丙醇凍存盒），然后將程序降溫盒放入到-80℃冰箱，24小時(shí)后干冰寄送或者液氮保存?？蓞⒖?0x 官方細(xì)胞凍存方法CG00014_Demonstrated_Protocol_FreshFrozenHumanMouseCellLineMix或者CG00039_Demonstrated_Protocol_FreshFrozenHumanPBMCs（10x官網(wǎng)可下載或者聯(lián)系諾禾銷(xiāo)售或技術(shù)提供）；

l?將液氮保存的細(xì)胞凍存管，采用干冰寄送至單細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室；

l?細(xì)胞復(fù)蘇后，若細(xì)胞活性≥80%，建議上機(jī) 10x/BD；若細(xì)胞活性＜80%，則不建議上機(jī)。

干冰寄送凍存組織抽核

l?客戶(hù)處理組織樣本，一般組織建議?0.2-0.5g/管，處理成黃豆大小，液氮速凍，然后把樣本放入裝有凍存管中保存，建議后續(xù)將凍存管放入凍存盒中?？蛻?hù)需標(biāo)明：樣本名稱(chēng)，組織類(lèi)型，離體保存時(shí)間；

l?凍存后拿出凍存管，采用干冰寄送（一般?10-20 公斤，根據(jù)運(yùn)輸季節(jié)及距離而定）至實(shí)驗(yàn)室（寄送過(guò)程中保證干冰充足）；

l?如樣本量足夠，建議首次寄送同一樣本?2-3 管重復(fù)，以作備用；

l?若是對(duì)照課題，建議首次寄送進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，預(yù)實(shí)驗(yàn)確定項(xiàng)目方案后，再進(jìn)行珍貴實(shí)驗(yàn)組的準(zhǔn)備和寄送。預(yù)實(shí)驗(yàn)建議提供測(cè)試樣本盡量全面；

l?若組織不是液氮速凍，而是直接放在干冰上或-80°冰箱速凍，組織 RNA 可能會(huì)略有降解，影響后續(xù)結(jié)果。

溫馨提示

單細(xì)胞懸液的質(zhì)量很大程度取決于樣本本身的狀態(tài)，制備過(guò)程可能會(huì)對(duì)基因的表達(dá)有一定影響，而運(yùn)輸凍存等也會(huì)對(duì)脆弱細(xì)胞有一定損傷，因此不建議做細(xì)胞全圖譜的老師選擇此方式，而對(duì)于研究分子機(jī)制的老師較為適用。另外樣本污染可能會(huì)對(duì)后續(xù)數(shù)據(jù)質(zhì)量造成嚴(yán)重影響，一定注意無(wú)菌操作。