1個(gè)載體連3個(gè)片段，都是用pcr方式擴(kuò)增，能擴(kuò)出正確條帶，回收后還對(duì)載體DpnI酶切處理了，加入seamless混合酶50℃反應(yīng)半小時(shí)到50分鐘左右，轉(zhuǎn)化涂板能長滿板，可就是用驗(yàn)證引物菌P驗(yàn)證沒一個(gè)有條帶的，思來想去查了很多就是不知道問題出在哪里了。請(qǐng)求各路大神幫忙解答一下，謝謝了！
Gibson無縫克隆總是失敗
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