AAV眶后靜脈竇注射方式具體如何操作?

眶后靜脈竇注射(新生小鼠)

1. 將新生小鼠放在預冷的紙巾上 30-60s, 進行麻醉 ; 或: 在紙巾上滴加 0.5 mL 異氟烷,并將紙巾放入50 mL 的錐形管中,擰緊瓶蓋,靜置 1 min。將錐形管水平放置后放入小鼠,擰緊瓶蓋,待小鼠完全停止活動后將其拿出;

注:避免新生小鼠直接接觸冰塊或麻醉時間過長以致小鼠死亡。

2. 將小鼠側(cè)臥位置于手術平臺,用拇指和食指(非慣用手)抓住頭部,避免對小鼠施加過大壓力;

3. 用酒精棉片對注射部位進行消毒處理;

4. 將 31G 注射器針頭斜置于眼上(3 點鐘位置), 以 30°角插入眶后靜脈竇中心約 3 mm,并緩慢注入 50 μL 病毒懸液;

5. 等待 5 s,緩慢抽出針頭,保持斜面向外,避免劃傷眼睛,然后立即用紗布按壓止血;

6. 確保小鼠的體溫和體色恢復正常,用 70% 的乙醇浸濕紙巾后輕輕擦拭小鼠,再用使用過的鼠墊將其擦拭一遍,以去除外來氣味,避免小鼠被排斥;

7. 使用加熱墊幫助小鼠恢復,用 70% 乙醇浸濕過的紙巾擦拭母鼠鼻子后再將小鼠放回籠中。


眶后靜脈竇注射(成年鼠)

1. 用異氟烷將小鼠麻醉后,使其背靠在非慣用手的手掌,并將拇指放置在小鼠氣管側(cè)面,施加溫和的壓力使小鼠的眼睛向外凸出;

2. 將 0.5mL 28G 注射器針頭插入小鼠內(nèi)側(cè)眼角,保持斜面朝外并將針頭以 45°角插入眶后靜脈竇中心約 5 mm,緩慢注入 150-200 μL 病毒懸液;

3. 輕輕拔出針頭,確保針頭不會劃傷小鼠角膜,然后用無菌紗布止血,并用藥膏涂抹小鼠眼睛;

4. 注射完畢后,將老鼠放回籠子使其恢復。

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