今天的實驗結(jié)果,和昨天的不一樣。


你盯著兩張膜,看了很久。上樣量一樣,抗體稀釋度一樣,封閉液是同一瓶,連洗膜的時間都掐著秒表。可昨天那條帶還端端正正亮著,今天怎么就不見了?
你開始往回倒,想昨天是不是多洗了一遍,今天是不是二抗孵育時間短了點。想了一圈,沒找到答案。又把昨天的膜翻出來對比,發(fā)現(xiàn)條帶的位置好像也飄了一點。不對,昨天那個位置,今天對應(yīng)的泳道是空的。
你合上筆記本,不想記了。
這不是第一次。上周跑的三個重復(fù),一個信號強(qiáng),兩個信號弱,統(tǒng)計出來標(biāo)準(zhǔn)差大得沒法看。前個月補(bǔ)數(shù)據(jù)的時候,發(fā)現(xiàn)半年前的那批條帶和現(xiàn)在跑的對不上,位置、強(qiáng)度、背景全都不一樣。你翻出當(dāng)年的實驗記錄,條件一模一樣,可結(jié)果就是不一樣。
最讓你心虛的,是投稿的時候。審稿人問:Figure 3B 的 Western 有沒有重復(fù)過?重復(fù)結(jié)果能提供嗎?你知道這個問題早晚會來,可每次看到,心里還是咯噔一下。重復(fù)是重復(fù)過,可那些重復(fù)的結(jié)果,和原圖放在一起,怎么看怎么不像一個媽生的。
實驗重復(fù)性差這件事,說起來都是淚。
有人說是操作的問題,你照著 SOP 一個字一個字摳,沒用。有人說是樣本的問題,你把同一批裂解液分裝凍存,每次用新的,還是沒用。有人說是運氣的問題,你呵呵一笑,心里想:這運氣也忒差了。
其實,很多時候,問題出在最基礎(chǔ)的那個環(huán)節(jié)——抗體。
抗體的批次間差異,是實驗重復(fù)性最大的隱形殺手。這一批抗體和下一批抗體,雖然名字一樣,貨號一樣,可它們來自不同的兔子,不同的免疫周期,不同的純化批次。哪怕工藝一模一樣,生物體本身的差異就在那兒,你擋都擋不住。結(jié)果就是,你手里的數(shù)據(jù)和三個月前的數(shù)據(jù),沒法放在一起比。
優(yōu)品生物做兔抗體,最在意的一件事,就是批次間穩(wěn)定。
過程也不復(fù)雜,就是做細(xì)。
從免疫原開始,我們就留了后手。同一靶點,優(yōu)品生物會同時免疫多只兔子,不是為了多產(chǎn)點血清,是為了篩選。免疫應(yīng)答最好的那幾只,留著;其他的,淘汰。這樣保證每一批抗體的源頭,都是同樣高水準(zhǔn)的動物個體。
純化環(huán)節(jié)更是一板一眼。優(yōu)品生物用的多步親和純化,每一步都有明確的標(biāo)準(zhǔn)。上一批抗體洗脫時的 UV 吸收曲線,和下一批必須對上;純化后的蛋白濃度,必須在同一個范圍;連保存緩沖液的配方,都精確到小數(shù)點后兩位。這些細(xì)節(jié),別人覺得差不多就行,我們覺得差一點都不行。
最關(guān)鍵的還是質(zhì)控。每一批優(yōu)品生物兔抗體出廠前,都要和上一批做平行對比。同樣的樣本,同樣的稀釋度,同樣的實驗條件,跑在一塊膠上。新批次的條帶,和舊批次的條帶,位置要對齊,強(qiáng)度要對等,背景要對得上。差一點點,這一批就不放行。
記得有個做信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的課題組,師姐從碩士到博士做了整整五年,同一個靶點,同一套實驗范式。她用過優(yōu)品生物三批不同的抗體,時間跨度四年。有一回整理數(shù)據(jù),她心血來潮,把四年前跑的第一張膜翻出來,和最新跑的一張放在一起對比——兩條帶的位置、粗細(xì)、灰度,幾乎一模一樣。
她發(fā)了條朋友圈,配圖是兩張膜并排的照片,文字只有四個字:時光倒流。
實驗重復(fù)性差的煩惱,不只是浪費試劑、浪費時間。它最折磨人的,是你永遠(yuǎn)不確定自己的結(jié)論是不是真的。今天出來的結(jié)果,你敢信嗎?明天還能不能重復(fù)出來?下個月補(bǔ)數(shù)據(jù)的時候,還能不能對上?這些問題懸在頭頂,做每一個實驗都像在賭。
優(yōu)品生物能做的,是讓你不用再賭。每一批抗體,都是上一批的復(fù)制品。你半年前的數(shù)據(jù),現(xiàn)在還能補(bǔ);你昨天跑出來的條帶,明天還能再跑一遍。那些本該花在科學(xué)問題上的心思,不用再浪費在懷疑工具上。
下一次,當(dāng)你準(zhǔn)備開始一組重復(fù)實驗,可以放心地加樣、孵育、顯影。
你知道,出來的結(jié)果,會和上次一樣。