巨噬細胞屬免疫細胞，是研究細胞吞噬、細胞免疫和分子免疫學(xué)的重要對象，RAW264.7（小鼠單核巨噬細胞白血病細胞）是科學(xué)實驗中常用到的細胞系，其來源為雄性Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤。

細胞名稱：小鼠單核巨噬細胞白血病細胞

細胞別稱：RAW264; RAW2647; RAW264.7; RAW-264.7; Raw 264.7; Raw264.7

產(chǎn)品貨號：TCM-C766

細胞形態(tài)：不規(guī)則圓形

生長特性：貼壁生長

培養(yǎng)體系：DMEM-H+10%FBS+1%Glutamax+1% Sodium Pyruvate+1%P/S

RAW264.7細胞培養(yǎng)注意要點

??在細胞生長的初始階段，細胞以貼壁的形式生長并呈現(xiàn)出長方體的形態(tài)和有“偽足”延伸。隨著培養(yǎng)時間的增加，細胞呈現(xiàn)圓形并以疊加的形式生長。細胞密度達到一定的程度，會有細胞以懸浮的方式散落到到培養(yǎng)基中，鏡下觀察會同時出現(xiàn)懸浮和貼壁兩種形態(tài)。

??該細胞傳代時不需要用胰酶消化。傳代時，吸走部分培養(yǎng)液，留下少許培養(yǎng)液（例如使用T25培養(yǎng)瓶留下2 ml），用無菌細胞刮刮拭培養(yǎng)表面將細胞刮落，充分吹打后接種到新的裝有新鮮培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶內(nèi)，混勻后進行培養(yǎng)。

??該細胞形態(tài)上包含松散貼壁的紡錘形和圓形或者立方形。當(dāng)細胞密度較大時，細胞會輕微脫落變圓或者許多細胞堆積在一起，有些細胞甚至脫落漂浮。這些漂浮的細胞是存活的，在傳代時應(yīng)收集起來，離心后細胞沉淀可以繼續(xù)培養(yǎng)。

??血清質(zhì)量差異可能引起細胞貼壁能力變化，建議選用高質(zhì)量的胎牛血清。

RAW264.7培養(yǎng)中出現(xiàn)長觸角的情況分析

??僅從細胞形態(tài)上，并不能判斷小鼠單核巨噬細胞白血病細胞（RAW264.7）是否分化，應(yīng)以相關(guān)分子標(biāo)記物的變化作為依據(jù)。

??根據(jù)ATCC官網(wǎng)信息（https://www.atcc.org/products/tib-71），RAW264.7的細胞類型為：巨噬細胞，形態(tài)描述為：單核細胞/巨噬細胞。參考ATCC提供的細胞照片，該細胞在正常培養(yǎng)狀態(tài)時確實會呈現(xiàn)出圓形和帶觸角的紡錘形或立方形兩種形態(tài)。

??小鼠單核巨噬細胞白血病細胞（RAW264.7）在高密度時，圓形細胞的比例相對會高一些。

RAW264.7細胞常見問題解決辦法

1. 復(fù)蘇后存活率不高

??原 因：?RAW264.7細胞不同生長密度下細胞形態(tài)不同，若復(fù)蘇密度太高，細胞增殖過快，會加劇細胞的營養(yǎng)缺失，加速細胞老化；若復(fù)蘇密度太低，細胞生長緩慢。

? 解決辦法：?直徑10cm的培養(yǎng)皿復(fù)蘇細胞，細胞數(shù)量控制在1.0×10^6~1.5×10^6個。

2. 細胞形態(tài)發(fā)生變異

? 原 因：?RAW264.7細胞的培養(yǎng)環(huán)境惡劣或吞噬過多抗原后會促使該細胞呈現(xiàn)梭形、長梭形，形態(tài)發(fā)生變化。

? 解決辦法：?改善細胞培養(yǎng)環(huán)境，例如與細胞接觸的器皿保證無菌，使用質(zhì)量較高的胎牛血清。

3. 不同形態(tài)細胞消化時間不等

? 原 因：?細胞老化后，形態(tài)發(fā)生變化，細胞偽足變得多且長，這使得這種形態(tài)的細胞變得較難消化，使用胰酶長時間消化又會對細胞產(chǎn)生較大損傷。

? 解決辦法：?可在正常時間終止消化，收集大部分正常狀態(tài)的細胞，再加入新的胰酶繼續(xù)消化，而偽足過多過長的細胞，即使加胰酶消化10min及以上也是難以消化下來的，勉強消化下來，對后續(xù)的實驗數(shù)據(jù)也會產(chǎn)生較大影響，即沒必要每次傳代都收集全部細胞，已經(jīng)發(fā)生分化的細胞無需保留要及時丟棄。

4. 細胞生長速度緩慢

? 原 因：?傳代時匯合度過低會導(dǎo)致細胞生長緩慢，甚至難以貼壁，或是細胞發(fā)生了支原體污染。

? 解決辦法：?定期傳代，控制好傳代比例，匯合度不可過低。及時進行支原體檢測，如發(fā)現(xiàn)污染，即刻使用支原體去除試劑進行清除。