1.思維導(dǎo)圖

DAY7-初涉測(cè)序.png
2. 一代測(cè)序
sanger法測(cè)序(“雙脫氧終止反應(yīng)法”,觀看):顧名思義,DNA在聚合酶的作用下進(jìn)行無數(shù)次合成,每次到了ddNTP就終止,這樣就得到不同長(zhǎng)度的序列,每個(gè)序列的末端就是帶有熒光標(biāo)識(shí)的ddNTP,這樣每次只測(cè)一個(gè)ddNTP,就能反推到序列了。
需要以下材料
- DNA模板
- 只有5‘端的帶熒光的dNTP 即ddNTP
- 引物(打開反應(yīng)的鑰匙,并起到在特定的點(diǎn)開始聚合)
- DNA聚合酶
- 4種dNTP
3. 二代測(cè)序(Illumina公司:邊合成邊測(cè)序)
需要:
DNA文庫(kù):把基因組DNA打斷,然后再許多的DNA片段兩頭加上了接頭。(接頭序列已知,但中間插入的DNA片段序列未知)
flowcell :8條通道,并做了化學(xué)修飾(兩種DNA引物種在上面,引物和DNA文庫(kù)的接頭(adapter)序列互補(bǔ)),當(dāng)DNA液體流過flowcell時(shí),接頭和引物配對(duì)的序列不會(huì)被沖走。
橋式PCR:將文庫(kù)種到flowcell上,并進(jìn)行擴(kuò)增
測(cè)序:和一代測(cè)序類似,(但是一個(gè)循環(huán)后,會(huì)使用酶將3’端的羥基暴露出來)
index:在adapter里面(還需要進(jìn)一步體會(huì))
4. 三代測(cè)序
PacBio公司的SMRT和Oxford Nanopore Technologies 的納米孔單分子測(cè)序技術(shù)為代表 (不懂0.0)
5. 專有名詞
基因組學(xué)(即核酸的序列分析)
全基因組
全外顯子組
簡(jiǎn)化基因組
轉(zhuǎn)錄組(基因表達(dá)分析)
mRNA-seq
。。。
蛋白組學(xué)
代謝組學(xué)

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一周的學(xué)習(xí)完成,感謝小花花和小豆豆老師!OVER~