病毒為什么一定要純化？

（1）病毒培養(yǎng)液中含有大量雜質(zhì)，包括缺損顆粒、病毒外殼、細(xì)胞毒素、培養(yǎng)基、血清以及細(xì)胞碎片等，這些雜質(zhì)若被注入動(dòng)物體內(nèi)，會(huì)引起宿主強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)；

（2）純化有利于病毒懸浮于體內(nèi)注射的緩沖液中。

病毒純化的原則：以保持病毒的生物活性和感染性為前提，去除非病毒雜質(zhì)，提取出高純度的病毒。

病毒純化方法

1. 超過(guò)濾法：利用超濾膜將水、鹽和小分子濾除，將大分子或病毒等顆粒截留，從而達(dá)到純化的目的，該方法主要用于大容量病毒樣品的濃縮，且回收率高。常用的超濾膜是硝酸纖維素濾膜。

注意：超濾膜孔徑一定要比病毒顆粒小，且只能去除比病毒小的細(xì)胞碎塊

2. 吸附法：利用病毒顆?；螂s質(zhì)的表面離子與吸附劑之間的親和作用，將病毒或雜質(zhì)吸附后，用一定的鹽溶液將病毒或雜質(zhì)洗脫下來(lái)。常用的吸附劑有紅細(xì)胞、磷酸鈣、離子交換樹(shù)脂等。

注意：吸附劑應(yīng)有較大的表面積和吸附能力，性質(zhì)穩(wěn)定并便于洗脫

3. 層析法：利用物質(zhì)中各組分的理化性質(zhì)差異，使各組分在固定相和流動(dòng)相中的分布程度和移動(dòng)速度不同，從而達(dá)到分離的目的。常用的層析法有凝膠層析法、離子交換層析法和親和層析法。

（1）凝膠層析法：樣品流經(jīng)具有一定孔徑大小的多孔葡聚糖凝膠時(shí)，各組分按分子的大小不同而被分離。常用的凝膠有磷酸鈣凝膠、氫氧化鋅凝膠和焦磷酸鎂凝膠。

（2）離子交換層析法：在一定pH條件下，利用病毒顆粒所帶電荷不同實(shí)現(xiàn)分離。適用于所有帶電荷的樣品的分離純化。

（3）親和層析法：利用樣品與基質(zhì)之間的特異性親和力，實(shí)現(xiàn)分離。適用于純化生物大分子。

4. 離心法：根據(jù)物質(zhì)的沉降系數(shù)或浮力密度的不同，利用離心力將物質(zhì)分離純化。常用于病毒純化的方法有差速離心法和密度梯度離心法。

（1）差速離心法：利用不同大小和比重的粒子的沉降速度不同，去除宿主細(xì)胞碎片等雜質(zhì)，最后使病毒沉淀。該方法能迅速處理大量樣品。

（2）密度梯度離心：利用超速離心，將病毒顆粒分配到密度梯度介質(zhì)中相等密度層中，吸出目的顆粒所在介質(zhì)層，即可到達(dá)分離純化的目的。常用的介質(zhì)有氯化銫和蔗糖。

5. 沉淀法：利用懸浮液中的病毒顆粒在重力作用下產(chǎn)生沉降作用，達(dá)到分離純化的目的。用于病毒純化的方法有聚乙二醇（PEG）沉淀法、等電點(diǎn)沉淀法和中性鹽沉淀法等。

（1）聚乙二醇（PEG）沉淀法：利用聚乙二醇與病毒顆粒形成多聚體，再離心即可沉淀。

（2）等電點(diǎn)沉淀法：利用病毒粒子在等電點(diǎn)時(shí)，所攜帶的正負(fù)電荷相等，分子間相互作用減弱，溶解度降低，從而發(fā)生沉淀。

（3）中性鹽沉淀法：利用高濃度的中性鹽使物質(zhì)的溶解度降低，從而發(fā)生沉淀。

6. 電泳法：利用病毒帶電粒子在電場(chǎng)作用下，向著與電性相反的電極的移動(dòng)速度不同，將組分分離成狹窄的區(qū)帶，最后收集病毒區(qū)帶部分。