1 15ml的搖菌管直接離心10000g（25000rpm） 1min tm。
2 倒掉上清液。
3 加入250ul solution 1/RNase A ，渦旋,吹打，顛倒，完全重懸沉淀，使其充分混勻。
4 將懸浮液移入1.5ml離心管中。
5 加入250ul solution2（輕，避免二氧化碳進(jìn)入），反轉(zhuǎn)與輕輕旋轉(zhuǎn)tube幾次后得到清澈的液體，此步驟持續(xù)2-3min。（不能超過5min）

6 加入350ul的solution3 ，立即倒轉(zhuǎn)幾次，指導(dǎo)形成白色絮狀沉淀，

7 最大轉(zhuǎn)速（大于13000g）for 10min，

8 將7號(hào)步驟中的上清液小心的移入柱子中，最大轉(zhuǎn)速離心1min
9 倒掉收集管中的液體，
10 加500ul的HBC buffer到柱子中
11 最大轉(zhuǎn)速離心1min
12倒掉收集管中的液體
13 加入700ulDNA wash buffer，最大轉(zhuǎn)速，1min，倒掉收集管中的液體。
14：重復(fù)13步驟一次
15：空的柱子離心2min，最大轉(zhuǎn)速，干燥15min'
16：柱子下?lián)Q一個(gè)干凈的ep管，加入50ulTAEbuffer（60℃預(yù)熱），停留2min，15000轉(zhuǎn)離心3min，測濃度，送測序。

測序：
保證濃度大于20ng/ul
15uldd水+3ul質(zhì)粒DNA

如果樣品過多，可以酶切鑒定后再去送測序：
酶切體系為：
10x mix：1ul
Clal：0.2ul
Kpn1：0.2
質(zhì)粒DNA：4ul
dd水：4.6ul
37度1-2h孵育
（兩個(gè)內(nèi)切酶就是當(dāng)初設(shè)計(jì)引物時(shí)，質(zhì)粒上沒有，但是目的基因上有的位點(diǎn)）
切后出現(xiàn)兩條條帶：比較小的是目的條帶，大的是質(zhì)粒條帶，結(jié)合分子量大小與marker可以送檢正確的克隆，看是否有突變，及其該突變是否會(huì)影響蛋白表達(dá)。