本來想等到組會(huì)上再說這部分內(nèi)容的，沒想到有幾位同學(xué)相當(dāng)厲害，已經(jīng)在啃Results里面一些技術(shù)細(xì)節(jié)了。于是就有了這篇匆匆趕出來的東西，希望能給被技術(shù)細(xì)節(jié)們困住的同學(xué)一點(diǎn)幫助。
Sumoylation of PKC-θ upon TCR stimulation
這部分需要確認(rèn)檢測TCR被激活后PKC-θ是否被SUMO化了，這里的思路是利用CD3（TCR復(fù)合體的一條主要的鏈）和CD28的抗體進(jìn)行刺激后利用SDS-PAGE電泳來檢測PKC-θ的分子量。（還是那句話，SDS-PAGE電泳是分子生物學(xué)研究中的一種非常重要的技術(shù)，建議自己找些資料多了解一下。）文中的Flag和Myc都是連接在需要檢測的蛋白上的Tag，方便后續(xù)的檢測。結(jié)果
observed 'up-shifted' PKC-θ bands that migrated more slowly than PKC-θ by SDS-PAGE, including two main 'up-shifted' bands around ~90 kDa and ~175 kDa (Supplementary Fig. 1a).
而且這些帶(bands)還會(huì)
were eliminated by coexpression of the main SUMO1 protease SENP1 (Supplementary Fig. 1a), which indicated that they probably represented sumoylated PKC-θ.
但是這種檢測是比較粗糙的，
We detected bands in a wide range of molecular masses above 83 kDa that migrated more slowly than PKC-θ (Fig. 1a), which suggested that the stimulation of T cells induced the sumoylation of PKC-θ.
還記得這一段開頭說PKC-θ的分子量是多少嗎？
PKC-θ has an apparent molecular mass of ~73 kilodaltons (kDa) by SDS-PAGE, consistent with its predicted molecular weight.
而SUMO protein則的質(zhì)量則是12 kDa，那么above 83 kDa意味著什么，就應(yīng)該很好理解了吧。
~PS: immunoprecipitation & immunoblot也是分子生物學(xué)最基礎(chǔ)、也最重要的技術(shù)之一，值得花些時(shí)間多了解一下。~
接下來的結(jié)果、圖以及后續(xù)的一些比較小的實(shí)驗(yàn)運(yùn)用的技術(shù)都差不多，注意好質(zhì)量和抗體都是抗什么的，保持耐心，不要暴走，基本就能把這部分Result讀下來了。
Lys325 and Lys506 are major PKC-θ-sumoylation sites
這段相對(duì)好讀一些，只要搞清楚兩點(diǎn)：
- K???R表示第???位的賴氨酸被突變了
- Figure 1b 那幅質(zhì)譜出來的圖運(yùn)用的方法是一整篇paper介紹的內(nèi)容，所以，如果你對(duì)質(zhì)譜相關(guān)技術(shù)不是特別感興趣的話，就別深究那幅圖了（捂臉）。
其它的碎碎念
T cell activation and TH2 differentiation require PKC-θ sumoylation中導(dǎo)入的GFP蛋白不僅用作后面檢測的Tag，也用作篩選導(dǎo)入成功細(xì)胞的gate.
剩下的figure基本都是一些電泳圖和直觀展現(xiàn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果的圖，電泳圖大家應(yīng)該已經(jīng)會(huì)看了，展現(xiàn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果的圖要注意這么個(gè)東西，
它的長度表示的是標(biāo)準(zhǔn)差或標(biāo)準(zhǔn)誤。
剩下的問題由于時(shí)間關(guān)系我就不寫先了，很快就到組會(huì)了，在組會(huì)上大家可以進(jìn)行更加詳細(xì)的討論。
