? ? ? ? 越來越多的證據表明,microRNA

(miRNA)所介導的基因調控影響了諸多自身免疫疾病包括炎癥性腸病(IBD)的發(fā)病過程,但是目前IBD發(fā)病過程中miRNA所發(fā)揮的生物學功能尚未

完全研究清楚。首先我們研究了2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)誘導的小鼠急性腸炎模型和IL-10敲除小鼠(IL-10KO)慢性結腸炎模型中

miRNA是否存在差異性表達,并且研究表達異常的miRNA能否通過調控致病基因從而在腸炎發(fā)病過程中起關鍵作用。我們通過miRNA芯片和實時熒光定

量PCR

(q-PCR)分別檢測了TNBS模型和IL-10敲除小鼠模型中miRNA的表達水平。接下來我們分別在原代結腸上皮細胞和結腸炎模型中研究了miR-

141和其潛在的調控基因CXCL12β的相互作用及其促使炎性細胞遷移能力的影響。我們通過在小鼠腸炎模型中灌腸給入miR-141的前體或抑制劑,來

研究miR-141的生物學功能。結果顯示無論在腸炎小鼠和克羅恩病(CD)患者的結腸組織中,miR-141和CXCL12β的表達水平都呈負相關。進

一步的研究表明,miR-141通過直接調控CXCL12β表達從而影響總CXCL12的表達最終抑制免疫細胞遷移。通過給入miR-141的前體或者抑

制劑來上調或下調TNBS腸炎或IL-10KO小鼠結腸中miR-141的水平,從而影響免疫細胞浸潤,最終實現緩解或惡化小鼠腸炎癥狀的目的。此外實驗

結果表明結腸部位過表達CXCL12β抵消了miR-141前體在TNBS腸炎模型中的療效。miR-141通過調控CXCL12β介導的招募免疫細胞進

入腸道炎癥部位的過程從而在腸炎的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用。通過調控miR-141的水平進而影響結腸組織中的CXCL12的表達水平和免疫細胞的浸

潤程度代表了一種全新的用于IBD治療的策略。當腸炎發(fā)生后,結腸部位伴有大量活化的炎癥細胞浸潤,此時可以通過抑制促炎因子的表達來阻止免疫細胞的活

化,同樣可以達到緩解腸炎癥狀的目的。為此我們研究了miR-16能否通過結合到腫瘤壞死因子-α

(TNF-α)和白細胞介素-12p40(IL-12p40)的AU富集區(qū)域(ARE)從而調控它們的表達。miR-16對TNF-α和IL-12p40

的調控作用在腹腔巨噬細胞層次得到了驗證。鑒于活化的結腸巨噬細胞是腸炎發(fā)生過程中TNF-α和IL-12p40的主要來源,而實驗室前期工作已經成功構

建了靶向輸送核酸藥物至結腸巨噬細胞的給藥體系,我們將miR-16前體通過乳糖酸修飾的低分子量殼聚糖(G-LMWC)輸送進結腸巨噬細胞來研究

miR-16前體對TNBS腸炎模型的療效。當灌腸給入miR-16前體/G-LMWC復合物后,腸炎組織中的TNF-α和IL-12p40的表達水平顯

著下降。體重變化,組織學評分和炎癥因子檢測都顯示miR-16前體治療有效緩解TNBS腸炎小鼠的炎癥癥狀。結合miR-16的調控功能以及靶向輸送核

酸藥物至結腸巨噬細胞的給藥體系來達到治療腸炎的目的治療策略,能為miRNA用于IBD的臨床治療提供了重要參考。自由基在IBD的發(fā)病過程發(fā)揮著重要

作用。3’3-二吲哚甲烷(DIM)可以通過乳腺癌易感基因1(BRCA1)相關的通路增強機體清除自由基的能力。本部分內容嘗試研究DIM是否可以用于

動物腸炎模型的治療并進一步探討了其可能的治療機制。DIM的療效評估主要是在TNBS誘導的急性腸炎模型中進行。我們在血管內皮和TNBS腸炎模型中嘗

試研究了DIM對氧化壓力誘發(fā)血管黏附分子-1(VCAM-1)的表達上調以及對后續(xù)的白細胞-血管內皮相互作用的影響。腹腔注射給入DIM可以有效緩解

TNBS小鼠模型的腸炎癥狀。進一步機制研究發(fā)現DIM可以上調結腸組織中BRCA1的表達,降低自由基生成,抑制VCAM-1表達及相應的白細胞-血管

內皮黏附,從而最終達到緩解腸炎的目的。DIM通過抑制自由基介導的VCAM-1的表達和腸道炎癥細胞浸潤揭示了一種新的治療策略,該策略還可以為臨床治

療IBD提供幫助。