產(chǎn)品概述
本產(chǎn)品為艾美捷Bethyl Laboratories推出的針對人源53BP1蛋白（p53 Binding Protein 1）的兔多克隆抗體，貨號A300-272A?？贵w以未標(biāo)記的完整IgG形式提供，適用于免疫組化（IHC）、免疫沉淀（IP）和蛋白質(zhì)印跡（WB）應(yīng)用。該抗體經(jīng)抗原親和純化，特異性識別53BP1蛋白中部區(qū)域（第350-400位氨基酸殘基之間的表位），對人源和小鼠源53BP1均有反應(yīng)性，可用于DNA損傷應(yīng)答、細(xì)胞周期檢查點調(diào)控及相關(guān)信號通路研究。
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核心參數(shù)
參數(shù)?詳細(xì)信息
靶標(biāo)?53BP1（p53 Binding Protein 1）
反應(yīng)種屬?人、小鼠
應(yīng)用?IHC, IP, WB
宿主?兔
克隆性?多克隆
形式?完整IgG
免疫原區(qū)域?第350-400位氨基酸（參考序列NP_005648.1）
同型?IgG
偶聯(lián)物?未偶聯(lián)
純度?抗原親和純化
濃度?1000 μg/ml
保存條件?2 - 8 °C
有效期?收貨后1年
緩沖液?Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7-8，含0.09%疊氮化鈉
制備與純化
本抗體采用固相固定化技術(shù)，使用特異性針對53BP1蛋白的表位進(jìn)行親和純化。具體而言，識別表位定位于人源腫瘤蛋白p53結(jié)合蛋白1（53BP1）的第350至400位氨基酸區(qū)域（基于GeneID 7158，序列編號NP_005648.1）。免疫球蛋白濃度通過比爾定律測定，設(shè)定1 mg/mL IgG在A280波長的吸光度為1.4。
應(yīng)用與推薦稀釋度
蛋白質(zhì)印跡（Western Blot, WB）
推薦稀釋度：1:10,000 – 1:25,000
凝膠建議：?推薦使用3-8% Tris-乙酸鹽凝膠，以保證大分子量蛋白（約240 kDa）的有效分離和轉(zhuǎn)印。
操作規(guī)范：
所有WB實驗均使用5% Milk-TBST作為封閉液和抗體稀釋液
一抗孵育條件：過夜孵育
細(xì)胞裂解液的WB檢測：使用山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（貨號A120-101P）
免疫沉淀物的WB檢測：使用HRP標(biāo)記的抗兔IgG輕鏈抗體，并在封閉緩沖液中添加5%正常豬血清（貨號S100-020）
免疫沉淀（Immunoprecipitation, IP）
推薦用量：6 μg抗體 / mg裂解液蛋白
免疫組化（Immunohistochemistry, IHC）
推薦稀釋度：1:1000 – 1:5000
抗原修復(fù)：?對于福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）組織切片，推薦使用檸檬酸緩沖液（pH 6.0）進(jìn)行熱誘導(dǎo)抗原修復(fù)。
檢測系統(tǒng)：?建議使用基于HRP或熒光標(biāo)記的檢測系統(tǒng)，配合適當(dāng)封閉步驟降低背景。
產(chǎn)品特性說明
特異性與靈敏度
本抗體經(jīng)親和純化，特異識別53BP1蛋白中部區(qū)域（第350-400位）。該表位位于蛋白的布里淵結(jié)構(gòu)域（BRCT）重復(fù)區(qū)域之前，避免了與其它含BRCT結(jié)構(gòu)域的蛋白（如BRCA1）的交叉反應(yīng)。由于為多克隆抗體，可識別目標(biāo)抗原上的多個表位，具有較高的檢測靈敏度，適用于低豐度蛋白的檢測。經(jīng)驗證，抗體對人源和小鼠源53BP1均有良好的反應(yīng)性，可用于跨物種實驗。
工作濃度優(yōu)勢
WB推薦稀釋范圍寬（1:10,000-1:25,000），稀釋度高，抗體的稀釋液消耗少，經(jīng)濟(jì)性好。IHC推薦性范圍為1:1000-1:5000，用戶可根據(jù)組織類型和固定條件靈活優(yōu)化。IP推薦用量明確（6 μg/mg裂解液），降低了預(yù)實驗摸索的工作量。
儲存穩(wěn)定性
在2-8°C條件下可穩(wěn)定保存1年（自收貨之日起）。緩沖液中含0.09%疊氮化鈉作為防腐劑，注意疊氮化物會抑制過氧化物酶活性，若計劃進(jìn)行HRP偶聯(lián)二抗檢測，需在實驗前通過透析或脫鹽柱去除。
別名：?53BP1; p202; p53-binding protein 1; p53BP1; TDRD30; TP53-binding protein 1; tumor protein 53-binding protein 1; tumor suppressor p53-binding protein 1
使用注意事項
1. 疊氮化物干擾：緩沖液中含有0.09%疊氮化鈉。若下游實驗使用HRP偶聯(lián)二抗進(jìn)行檢測，需注意疊氮化物會抑制HRP活性。建議在進(jìn)行WB或IHC前，通過PBS透析或使用脫鹽柱去除疊氮化物。
2. 抗體分裝：雖然產(chǎn)品在2-8°C條件下穩(wěn)定，但若需長期保存或避免反復(fù)取用，可考慮分裝后保存于-20°C或-80°C。注意避免反復(fù)凍融，以免降低抗體活性。
3. 陽性對照建議：
WB：建議使用經(jīng)電離輻射（如10 Gy γ射線）處理后的HeLa或293T細(xì)胞裂解液作為陽性對照，處理后可觀察到53BP1灶點相關(guān)蛋白條帶增強(qiáng)。
IHC：使用人扁桃體或睪丸組織作為陽性對照，這些組織中DNA復(fù)制和重組活躍，53BP1表達(dá)較高。
IF：雖然未經(jīng)驗證，但基于多克隆抗體的特性，該抗體可能適用于免疫熒光，建議預(yù)實驗驗證。
4. 應(yīng)用驗證范圍：本產(chǎn)品已在WB、IP和IHC應(yīng)用中得到驗證，但不保證在其他應(yīng)用（如免疫熒光、ChIP等）中的效果。如需拓展應(yīng)用，建議自行進(jìn)行預(yù)實驗優(yōu)化條件。
5. 實驗參數(shù)優(yōu)化：推薦的WB稀釋范圍（1:10,000-1:25,000）為高稀釋度起始參考。對于低表達(dá)樣本或組織裂解液，可適當(dāng)降低稀釋倍數(shù)（如1:5,000-1:10,000）。IHC實驗中，抗原修復(fù)條件和抗體孵育時間需要根據(jù)組織類型進(jìn)行優(yōu)化。
6. 凝膠選擇：53BP1的分子量約為240 kDa，使用常規(guī)10% SDS-PAGE凝膠分離效果較差。建議使用3-8% Tris-乙酸酯梯度凝膠，并適當(dāng)延長轉(zhuǎn)印時間（濕轉(zhuǎn)推薦100 V，2小時或4°C 30 V過夜）。
