常用的細胞培養(yǎng)基

經(jīng)典的商品化培養(yǎng)基有很多種,其中 DMEM、 RPMI 1640、 MEM 、 DMEM/F12 都是應(yīng)用最廣泛的培養(yǎng)基。其他如:M199 、 IMDM 、 L15培養(yǎng)基等也用于某些細胞的培養(yǎng)。

1、BME細胞培養(yǎng)基

基礎(chǔ)Eagle培養(yǎng)基(Basal Medium Eagle),1955年Eagle設(shè)計,BSS+12種氨基酸+谷氨酰胺+8種維生素。簡單、便于添加,適于各種傳代細胞系和特殊研究用,在此基礎(chǔ)上改良的細胞培養(yǎng)基品種有MEM、DMEM、IMDM等。

2、MEM細胞培養(yǎng)基

又稱低限量Eagle培養(yǎng)基(Minimal Essential Medium),1959年在Eagle's基礎(chǔ)培養(yǎng)基(BME)上修改而來,刪去賴氨酸、生物素,氨基酸濃度增加,適合多種細胞單層生長,有可高壓滅菌品種,是一種最基本、試用范圍最廣的培養(yǎng)基,但因其營養(yǎng)成分所限,針對生產(chǎn)之特定細胞培養(yǎng)與表達時,并不一定是使用效果最佳或者最經(jīng)濟的培養(yǎng)基。

3、DMEM細胞培養(yǎng)基

DMEM是由Dulbecco改良的Eagle培養(yǎng)基,由MEM培養(yǎng)基改良而來,起初是為小鼠成纖維細胞設(shè)計的。DMEM的氨基酸濃度是MEM的兩倍,維生素濃度是MEM的4倍,采用雙倍的HCO3-和CO2濃度起到更好的緩沖作用。最初的配方中葡萄糖含量為1000 mg/L,后來為了某些細胞的生長需要,將葡萄糖含量又調(diào)整為4500 mg/L,這就是大家常說的低糖和高糖了。

DMEM培養(yǎng)基是貼壁培養(yǎng)細胞優(yōu)先選擇的一款培養(yǎng)基。根據(jù)葡萄糖含量的高低,DMEM培養(yǎng)基一般可以區(qū)分為高糖型(低于4500mg/L)和低糖型(低于1000mg/L)兩種。其中,高糖型DMEM培養(yǎng)基有利于細胞停泊于一個位置生長,適于生長較快、附著較困難的腫瘤細胞等。而做單抗細胞融合時,則一般會選用使用低糖型DMEM培養(yǎng)基。高糖型DMEM使細胞生長過快,反而不利于融合細胞的染色體穩(wěn)定。

DMEM培養(yǎng)基的高糖與低糖有哪些區(qū)別?

用途不同:低糖DMEM用于養(yǎng)干細胞可防分化,高糖DMEM可以養(yǎng)大多數(shù)哺乳動物的細胞。

適用性不同:高糖DMEM 適于培養(yǎng)代謝旺盛的細胞,而低糖適于培養(yǎng)一般代謝水平的細胞。代謝活躍的細胞,如ES,低糖培養(yǎng)基不能提供足夠的碳源。

性質(zhì)不同:低糖的酵母適合在7%以下的糖濃度中生存,而高糖的酵母適合在7%以上糖濃度中生存。

DMEM高糖培養(yǎng)基P04-04550含穩(wěn)定谷氨酰胺,含25mM Hepes,不含丙酮酸鈉,廣泛應(yīng)用于支持哺乳動物細胞培養(yǎng)的廣譜培養(yǎng)基。相比于BME中增加了4倍的氨基酸和維生素含量。來源:用來培養(yǎng)未轉(zhuǎn)化過的老鼠和雞的細胞培養(yǎng)。有高糖(4.5g/l)、低糖(1g/l)和無糖等類型。

4、IMDM細胞培養(yǎng)基

Guilber 和Iscove將Dulbecco' Medium 改良為 Iscove's Medium,用于培養(yǎng)紅細胞和巨噬細胞前體。此種培養(yǎng)液含有硒、額外的氨基酸和維生素、丙酮酸鈉和HEPES。并用硝酸鉀取代了硝酸鐵。IMDM還能夠促進小鼠B淋巴細胞,LPS刺激的B細胞,骨髓造血細胞,T細胞和淋巴瘤細胞的生長。IMDM為營養(yǎng)非常豐富的培養(yǎng)液,因此可以用于高密度細胞的快速增殖培養(yǎng)。

5、RPMI-1640細胞培養(yǎng)基

Moore等人于1967年在Roswell Park Memorial Institute研制,針對淋巴細胞培養(yǎng)設(shè)計,含BSS+21種氨基酸+維生素11種等。現(xiàn)也用于懸浮細胞培養(yǎng),如哺乳動物、特殊造血細胞、正常或惡性增生的白細胞,雜交瘤細胞的培養(yǎng),其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴細胞、T細胞淋巴瘤細胞以及HCT-15上皮細胞等均可參考使用。

6、HamF10細胞培養(yǎng)基

1963年Ham設(shè)計,含微量元素,可在血清含量低時用,適用于克隆化培養(yǎng)。F10適用于倉鼠、人二倍體細胞,特適于羊水細胞培養(yǎng)。

7、DMEM/F12細胞培養(yǎng)基

Ham's F12是為在低血清濃度下克隆CHO細胞而設(shè)計的,現(xiàn)在也廣泛應(yīng)用于克隆形成率的分析及原代培養(yǎng)。F12還可以與DMEM等體積混合使用,得到一種高濃度與成分多樣化相結(jié)合的產(chǎn)物,這種培養(yǎng)基已應(yīng)用于許多原代培養(yǎng)及更難養(yǎng)的細胞系的培養(yǎng)。由于營養(yǎng)成分豐富,且可以使用較少血清,故也常作為無血清培養(yǎng)基的基礎(chǔ)培養(yǎng)基。

8、M199細胞培養(yǎng)基

1950年Morgan等設(shè)計的具有確定化學(xué)成分的細胞培養(yǎng)液,即M-199。除BSS外,含有53種成分,為全面培養(yǎng)基,主要用于雞胚成纖維細胞培養(yǎng)。此培養(yǎng)液必須輔以血清才能支持長期培養(yǎng)。M-199可用于培養(yǎng)多種種屬來源的細胞,并能培養(yǎng)轉(zhuǎn)染的細胞?,F(xiàn)廣泛用于病毒學(xué)、疫苗生產(chǎn)。

9、McCoy5A培養(yǎng)基

1959年MeCoy為肉瘤細胞設(shè)計,BSS+40種成分??芍С侄喾N(如骨髓、皮膚、肺和脾臟等)的原代移植物的生長,除適于一般的原代細胞培養(yǎng)外,主要用于作組織活檢培養(yǎng)、一些淋巴細胞培養(yǎng)以及一些難培養(yǎng)細胞的生長支持。例如Jensen大鼠肉瘤成纖維細胞、人淋巴細胞、HT-29、BHL-100等上皮細胞。

10、L15 細胞培養(yǎng)基

L-15培養(yǎng)液適用于快速增殖瘤細胞的培養(yǎng),用于在CO2缺乏的情況下培養(yǎng)腫瘤細胞株。此培養(yǎng)液采用磷酸鹽緩沖體系,氨基酸組成進一步改良,并由半乳糖替代了葡萄糖。

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