RAW 264.7細(xì)胞分化處理

RAW 264.7細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中密度過(guò)大，培養(yǎng)基顏色發(fā)黃都易刺激細(xì)胞分化，分化的RA264.7細(xì)胞呈多角形，體積明顯增大，時(shí)常有較長(zhǎng)的黑色觸角，那么RAW 264.7細(xì)胞如何避免分化及分化該怎么處理呢?

一、RAW 264.7細(xì)胞如何避免細(xì)胞分化

RAW 264.7細(xì)胞消化時(shí)不能用胰酶消化，消化會(huì)造成細(xì)胞分化，客戶可以用移液槍吹打，會(huì)比巴氏吸管方便一點(diǎn)。

二、RAW 264.7細(xì)胞分化處理

前面我們說(shuō)到RAW 264.7不能用胰酶消化，許多實(shí)驗(yàn)室用細(xì)胞刮傳代，這是一種非常經(jīng)典好用的方法。在這邊我們推薦“吹打傳代”方法，其操作步驟簡(jiǎn)單，也能更好地控制細(xì)胞分化率。

一

吹打傳代操作步驟

1.輕拍幾下培養(yǎng)皿

2.用1ml 的槍或者巴氏管把細(xì)胞吹下來(lái)

3.細(xì)胞吹下來(lái)后轉(zhuǎn)移到15ml離心管

4.1200rpm

約250g

離心3min

5.去上清，用新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞

6.按比例接種到新的培養(yǎng)皿中

二

吹打傳代時(shí)機(jī)

1.當(dāng)細(xì)胞密度較低的時(shí)候，可能不太好吹下來(lái)。

2.當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%的時(shí)候，最容易吹下去。

三

操作注意事項(xiàng)

1.RAW 264.7細(xì)胞三天不傳代更容易分化，很難吹下去，每一次接種密度都要控制好;

2.分化的細(xì)胞貼壁牢固，傳代的時(shí)候請(qǐng)勿強(qiáng)制性吹下這些細(xì)胞，只接種容易吹下的那些未分化細(xì)胞；

3.吹打的力度一定要輕，切勿暴力吹打；

4.細(xì)胞的貼壁性和培養(yǎng)器皿的材料也有關(guān)，有時(shí)RAW 264.7 會(huì)出現(xiàn)太容易吹下去的情況，連分化細(xì)胞都貼壁較松，此時(shí)更適宜用巴氏管吹打；

5.培養(yǎng)時(shí)，無(wú)法保證100% 不分化，通過(guò)傳代可以將分化比例控制在一定范圍；