http://mooc.guokr.com/note/16694/
1.1 介紹
1.2 DNA結(jié)構
1.3 DNA復制
快速、完全、精確
1.4 The Chemistry of DNA Replication
DNA聚合酶催化了反應進行
PTJ：primer template junction
引物的3‘端被延長
1.5The DNA Polymerase Active Site
DNA聚合酶催化至少16種反應，但只有一個活性位點
DNA雙鏈構成
1.6The Structure of DNA Polymerase
1.7Catalysis by the Fingers of DNA Polymerase
1.8Mistakes by DNA Polymerase
每合成十萬對堿基會發(fā)生一個錯誤
1.9校對核酸外切酶Proofreading Exonucleases
修正錯誤：移除錯配的核苷酸
2.1Incorporation Assay核素摻入法
檢測DNA活性的方法。檢測聚合物的合成情況。
標記dNTP，可以用熒光或放射性標記。在每個時間點加入SDS或EDTA來終止反應。從dNTP中分離DNA并測量其中包含了多少標記的dNTP。那么怎樣從dNTP中分離DNA呢？需要用到下面的方法：
2.2Filter Binding Incorporation Assay
把dNTP根據(jù)電荷從濾紙上洗脫。因為DNA不容易被洗脫，而dNTP容易被洗脫
2.3Electrophoresis Incorporation Assays凝膠電泳
- 加熱將DNA變性
- 如果是瓊脂糖ararose則添加NaOH，如果是聚丙烯酰胺，則添加尿素。為了防止退火
- 可以看到產(chǎn)物的長度，但比較慢
2.4引物延伸實驗Primer Extension Assay
2.5持續(xù)合成能力Processivity
是與聚合物酶相關的能力。與每個聚合物分子結(jié)合的酶的反應循環(huán)數(shù)。
2.6DNA Polymerase Processivity Assay
模板競爭分析，測定持續(xù)合成能力。只測量第一次合成的情況。
