為什么今天要提到無(wú)縫拼接這項(xiàng)技術(shù)呢？
在開(kāi)展動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí)，不可避免地要拍攝完整器官切片的圖像，這也逐漸成為很多SCI期刊的要求。（如下圖所示）
局部圖像幾乎都存在“人為選擇”偏倚，甚至無(wú)法反映出真實(shí)情況，這種“管中窺豹”式的結(jié)果顯然說(shuō)服力不強(qiáng)。
然而，在具體執(zhí)行時(shí)，全數(shù)字切片掃描儀器僅僅只能幫助我們獲取小動(dòng)物（小鼠/大鼠）明場(chǎng)下的全器官圖像，獲取熒光場(chǎng)下的全器官圖像很難。
此外，受限于玻片尺寸和物鏡視野的顯示，大動(dòng)物（兔、比格犬、食蟹猴等）的全器官圖像很難獲取。
今天的推文就是為了以上問(wèn)題。
圖文教程
1.?搞科研都知道Image J可以用來(lái)分析蛋白條帶或IHC平均光密度。你肯定想不到，它還可以用來(lái)無(wú)縫拼接圖像。
一定要下載FiJi版本，接下來(lái)要用到其中的插件Stitching，否則無(wú)法進(jìn)行后續(xù)操作。（開(kāi)源軟件下載地址：https://imagej.net/Fiji）
2.?為避免軟件與系統(tǒng)沖突 或出現(xiàn)閃退，軟件盡量安裝在C盤(pán)的非program file (x86）的非中文文件夾內(nèi)。
3.?大尺寸的器官在4X物鏡下拍攝多張照片，保證部分區(qū)域有重合，這樣可以提高拼接精準(zhǔn)度。例如想要獲取熒光染色后全腎圖像，可以在4X物鏡下拍攝2張有重合的圖片。（現(xiàn)實(shí)中，兩次拍攝的圖片絕對(duì)不存在無(wú)重合區(qū)的兩張圖，這是最常見(jiàn)的情況）
4.?用Image J 打開(kāi)拍攝好的兩張圖。
5.?選中其中一張圖，按照如下選擇，將RGB彩圖分解為R、G、B三種通道圖像。
6.?同理，將另外一張彩圖也進(jìn)行分解。
7.?然后點(diǎn)擊Plugins，選擇Stitching，選擇Pairwise stitching。
8.?在彈窗中，分別按照對(duì)應(yīng)的通道選擇需要拼接的圖像，比如紅-紅、綠-綠、藍(lán)-藍(lán)。然后按照如下設(shè)置。
9.?稍等片刻，然后就能得到紅色通道的無(wú)縫拼接圖像。
10.?用同樣的操作依次獲取綠色通道和藍(lán)色通道的縫拼接圖像。
11.?點(diǎn)擊image，選擇color，選擇merge channels。將拼接好的紅-紅、綠-綠、藍(lán)-藍(lán)單通道圖像merge成為RGB彩圖，如下設(shè)置后點(diǎn)擊OK。
12.?獲得無(wú)縫拼接后的RGB彩圖?？牲c(diǎn)擊file ,save as保存為所需格式圖像。
13.?最終效果如下。完美的無(wú)縫拼接效果！
Ending~~
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