一、產(chǎn)品概述
本文介紹一款由艾美捷Bethyl Laboratories推出的針對(duì)人BARD1（BRCA1相關(guān)RING結(jié)構(gòu)域蛋白1）的兔多克隆抗體（貨號(hào)：A300-263A）。該抗體特異性識(shí)別BARD1蛋白的第250–300位氨基酸區(qū)域，經(jīng)抗原親和純化后以完整IgG形式提供，未偶聯(lián)標(biāo)記物。已驗(yàn)證反應(yīng)種屬為人，可應(yīng)用于免疫沉淀（IP）及免疫印跡（WB）實(shí)驗(yàn)。
BARD1與BRCA1形成異源二聚體，作為E3泛素連接酶參與DNA損傷應(yīng)答、雙鏈斷裂修復(fù)及中心體數(shù)量調(diào)控?？煽康奶禺愋钥贵w對(duì)于研究BARD1在基因組穩(wěn)定性維持及腫瘤發(fā)生中的功能至關(guān)重要。
二、詳細(xì)規(guī)格參數(shù)
參數(shù)?| 信息
靶標(biāo)?| BARD1（BRCA1 associated RING domain 1）
反應(yīng)種屬?| 人
應(yīng)用?| IP, WB
宿主?| 兔
克隆性?| 多克隆
形式?| 完整IgG
免疫原?| 第250–300位氨基酸之間的區(qū)域
亞型?| IgG
偶聯(lián)物?| 未偶聯(lián)
純度?| 抗原親和純化
免疫原種屬?| 人
濃度?| 1000 μg/ml
存儲(chǔ)條件?| 2–8 °C
有效期?| 收貨后1年
緩沖液?| Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊氮化鈉
三、抗原表位與生產(chǎn)信息
該抗體識(shí)別人BARD1蛋白第250–300殘基之間的表位，參考序列號(hào)為NP_000456.1（GeneID 580）。免疫原對(duì)應(yīng)此區(qū)間。
純化工藝采用固相載體固定的表位特異性親和層析，確保僅富集識(shí)別目標(biāo)表位的IgG分子，顯著降低非特異性交叉反應(yīng)。免疫球蛋白濃度通過(guò)比爾定律測(cè)定（1 mg/mL IgG在A280處吸光度為1.4）。
四、應(yīng)用方法與推薦條件
4.1 免疫沉淀（IP）
推薦用量：6 μg 抗體 / mg 蛋白裂解液
根據(jù)抗體濃度1000 μg/ml換算，6 μg對(duì)應(yīng)6 μl抗體。建議在裂解緩沖液中加入適當(dāng)?shù)鞍酌敢种苿?°C旋轉(zhuǎn)孵育過(guò)夜后使用Protein A/G瓊脂糖珠捕獲復(fù)合物。
4.2 免疫印跡（WB）
推薦稀釋比：1:500 至 1:2500
通用條件：?
所有WB實(shí)驗(yàn)均采用含5%脫脂牛奶的TBST作為封閉液及抗體稀釋液。一抗孵育方式為4°C過(guò)夜。
檢測(cè)體系差異：
樣本類(lèi)型?| 推薦二抗 | 特殊說(shuō)明
細(xì)胞裂解液WB | 山羊抗兔IgG（H+L）二抗（貨號(hào)A120-101P） | 無(wú)需額外阻斷
免疫沉淀產(chǎn)物WB | 抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體 | 封閉緩沖液中需添加5%正常豬血清（貨號(hào)S100-020）以阻斷重鏈交叉反應(yīng)
注意事項(xiàng)：?
由于BARD1分子量約為87 kDa（與BRCA1形成復(fù)合物后更大），建議使用10–12% SDS-PAGE或梯度凝膠。轉(zhuǎn)膜后可考慮使用PVDF膜以增強(qiáng)大分子量蛋白的吸附。
五、儲(chǔ)存與穩(wěn)定性
未稀釋抗體必須儲(chǔ)存于2–8°C，嚴(yán)禁冷凍。冷凍會(huì)導(dǎo)致IgG聚集和活性喪失。在推薦條件下，自收貨之日起可穩(wěn)定保存1年。緩沖液中的0.09%疊氮化鈉可抑制微生物生長(zhǎng)，若需用于細(xì)胞培養(yǎng)或活體實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)使用脫鹽柱或透析去除。
六、操作建議與常見(jiàn)問(wèn)題排查
6.1 WB無(wú)信號(hào)或弱信號(hào)
提高一抗?jié)舛龋航ㄗh從1:500開(kāi)始試探性稀釋。
延長(zhǎng)曝光時(shí)間：BARD1本底表達(dá)水平可能低于管家蛋白，建議ECL曝光5–30分鐘。
使用陽(yáng)性對(duì)照：建議使用過(guò)表達(dá)BARD1的細(xì)胞裂解液（如HEK293T轉(zhuǎn)染BARD1-Flag）驗(yàn)證抗體活性。
檢查蛋白分子量：確認(rèn)轉(zhuǎn)印后保留>100 kDa區(qū)域，部分低分子量marker不足以指示。
6.2 IP出現(xiàn)非特異性條帶
嚴(yán)格執(zhí)行預(yù)清除：裂解液與同型IgG或無(wú)關(guān)抗體+Protein A/G珠子孵育1小時(shí)。
增加洗滌嚴(yán)謹(jǐn)性：使用含0.5% NP-40或0.1% SDS的裂解緩沖液洗滌3–5次。
使用輕鏈特異性二抗：WB檢測(cè)IP產(chǎn)物時(shí)務(wù)必采用抗兔IgG輕鏈HRP抗體，避免重鏈（約55 kDa）干擾目標(biāo)信號(hào)。
6.3 保存與運(yùn)輸注意事項(xiàng)
產(chǎn)品在冰袋或冷藏條件下運(yùn)輸。收貨后應(yīng)立即存于2-8°C，不可分裝于無(wú)蛋白的低吸附管中長(zhǎng)期儲(chǔ)存，否則抗體濃度會(huì)因表面吸附而下降。若需長(zhǎng)時(shí)間多次取用，可于無(wú)菌條件下分裝至含載體蛋白（如0.1% BSA）的管中，但分裝后仍需冷藏，勿凍存。
