????????關(guān)于熱啟動(dòng)Taq酶，大家還有很多想要了解的方面，小編搜集了一些同學(xué)的問(wèn)題，相信這些答案能幫助很多科研小伙伴更加了解熱啟動(dòng)Taq酶哦~

圖1.? Taq DNA聚合酶的三維結(jié)構(gòu)

問(wèn)題一：我的樣本是腫瘤細(xì)胞，可以試試熱啟動(dòng)Taq酶嗎？

????????可以。諸如來(lái)源于腫瘤、土壤、糞便、血液等困難DNA片段的擴(kuò)增對(duì)Taq酶的特異性要求很高。若使用普通Taq酶進(jìn)行PCR反應(yīng)很容易導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果，因?yàn)門(mén)aq酶的最適溫度為72℃，此時(shí)活性最佳，低于這個(gè)溫度時(shí)，仍會(huì)有較低的活性，極易錯(cuò)配或形成引物二聚體，尤其是當(dāng)設(shè)計(jì)的引物3’端是G或C，錯(cuò)配的鏈很難重新解開(kāi)。而經(jīng)過(guò)了化學(xué)修飾、配體法修飾或抗體法修飾的熱啟動(dòng)Taq酶可以避免在加樣、升溫等階段容易出現(xiàn)的非特異擴(kuò)增和引物二聚體產(chǎn)生，大幅提升了反應(yīng)的特異性。像一些國(guó)外品牌ABI、Takara，國(guó)內(nèi)的Starvio等等，都具有特異性不錯(cuò)的熱啟動(dòng)Taq酶產(chǎn)品。就本實(shí)驗(yàn)室經(jīng)驗(yàn)來(lái)談，與經(jīng)過(guò)抗體封閉的熱啟動(dòng)Taq酶相比，StarvioHC熱啟動(dòng)酶的活性封閉更為徹底，反應(yīng)特異性也更高，配套的反應(yīng)緩沖液經(jīng)多次優(yōu)化，能有效抵御復(fù)雜樣本種雜質(zhì)的干擾，特別適合從復(fù)雜的DNA樣本中（腫瘤組織、血液等）擴(kuò)增低拷貝基因。

問(wèn)題二：我要做qPCR，但是目標(biāo)基因豐度很低，可以使用熱啟動(dòng)Taq酶嗎？

????????當(dāng)然可以！低豐度的靶分子往往被其他DNA分子所淹沒(méi)，從而影響PCR反應(yīng)的效率和產(chǎn)量。熱啟動(dòng)Taq酶可以提高PCR反應(yīng)的特異性和靈敏性，從而可以輸出更多的目的片段。市面上不乏高靈敏度的熱啟動(dòng)Taq酶產(chǎn)品，不用考慮經(jīng)費(fèi)問(wèn)題，可以選擇Thermo

????????Fisher Scientific的Dream Taq熱啟動(dòng)DNA聚合酶，可擴(kuò)增低至3pg的人基因組DNA；但想要性?xún)r(jià)比高，并且靈敏度更高的可使用Starvio熱啟動(dòng)酶，據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，每反應(yīng)體積能夠檢測(cè)的最低量可達(dá)2pg人基因組DNA。

問(wèn)題三：我想檢測(cè)泌尿生殖道支原體、衣原體感染，需要進(jìn)行多重PCR，有好用的熱啟動(dòng)Taq酶推薦嗎？

????????有的?？梢灾С侄嘀豍CR的熱啟動(dòng)Taq酶對(duì)酶動(dòng)力要求很高，這個(gè)根據(jù)您的實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)來(lái)，充足的話(huà)可以看看英國(guó)Bioline公司的熱啟動(dòng)Taq酶（lmmulase）酶動(dòng)力較好，可做4重PCR，等量起始模板CT30時(shí)的熒光信號(hào)值最高。目前國(guó)內(nèi)能夠支持多重PCR的熱啟動(dòng)Taq酶并不多，我們實(shí)驗(yàn)室曾經(jīng)使用Starvio熱啟動(dòng)酶檢測(cè)過(guò)泌尿生殖道支原體、衣原體感染，如圖所示，擴(kuò)增曲線(xiàn)典型，酶動(dòng)力強(qiáng)勁，很適合于多重基因檢測(cè)。值得一提的是，Starvio熱啟動(dòng)酶支持四重以?xún)?nèi)的PCR檢測(cè)哦，而且性?xún)r(jià)比很高，不妨一試！

圖2. 使用Starvio熱啟動(dòng)酶檢測(cè)泌尿生殖道支原體、衣原體感染。1為支原體擴(kuò)增曲線(xiàn)，2為衣原體擴(kuò)增曲線(xiàn)，3為內(nèi)參基因擴(kuò)增?？梢?jiàn)，Starvio熱啟動(dòng)酶具有靈敏度高，擴(kuò)增曲線(xiàn)好，酶動(dòng)力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，很適合于多重基因檢測(cè)。

問(wèn)題四：在使用Starvio熱啟動(dòng)Taq酶進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí)，需要注意什么？

????????問(wèn)出這個(gè)問(wèn)題的同學(xué)已經(jīng)是個(gè)具備科研素養(yǎng)的科研人了哦~實(shí)驗(yàn)的成功除了依靠性能優(yōu)異的試劑外，還需要各方面因素的加持。我們?cè)谑褂肧tarvio熱啟動(dòng)Taq酶時(shí)，一定要注意以下幾點(diǎn)，這樣才能獲得滿(mǎn)意的結(jié)果！

1.熱啟動(dòng)—熱啟動(dòng)Taq酶需要在高溫下啟動(dòng)其活性。PCR反應(yīng)開(kāi)始前，應(yīng)將反應(yīng)混合物95℃加熱5分鐘。

2.適當(dāng)混合—反應(yīng)液體量越少，混合越敏感。應(yīng)選擇適當(dāng)?shù)墓艿阑蚍磻?yīng)器，并進(jìn)行充分混合。

3.模板用量—模板DNA的量并非越多越好，應(yīng)根據(jù)其來(lái)源、濃度、純度、目標(biāo)片段的豐度等進(jìn)行調(diào)試。

4.熱啟動(dòng)Taq酶和引物—實(shí)驗(yàn)中引物的設(shè)計(jì)也非常重要，直接關(guān)系結(jié)果的好壞，要選擇有良好擴(kuò)增性能的組合，以保證PCR反應(yīng)的穩(wěn)定和高效。