1、運(yùn)行儀器

1.1打開電腦

1.2打開定量PCR儀底座開關(guān)

1.3啟動CFX Manager軟件

2、放置樣品

2.1將PCR反應(yīng)體系加入到0.2ml底緣八聯(lián)管，蓋上管蓋；或加入底緣96孔板，用光學(xué)級封膜封好。

注意：必須戴一次性塑料手套，不要讓手指接觸到反應(yīng)管表面。將反應(yīng)管按順序放入儀器的加熱孔中。

3、設(shè)置程序，運(yùn)行試驗(yàn)

3.1定量PCR軟件操作基本步驟為：

a.設(shè)置熱循環(huán)程序文件（protocol tab）

b.設(shè)置反應(yīng)板文件（plate tab）。

c.點(diǎn)擊"start run"鍵，運(yùn)行程序。

3.2熱循環(huán)程序文件（protocol tab）設(shè)置指南：點(diǎn)擊create new（創(chuàng)建新程序）

3.3反應(yīng)板設(shè)置文件（plate tab）設(shè)置指南：選擇本次試驗(yàn)所需要使用的熒光染料種類；單機(jī)樣品類型；如要某些反應(yīng)孔第一熒光染料對應(yīng)的樣品類型為標(biāo)準(zhǔn)品（standard），點(diǎn)擊‘dilution series’鍵可設(shè)置其標(biāo)準(zhǔn)品濃度及稀釋倍數(shù)。

3.4點(diǎn)擊‘start run’鍵。單擊open lid（打開熱蓋）或close lid（關(guān)閉熱蓋）放置樣品；單擊start run，保存文件，開始運(yùn)行程序。

4、結(jié)果分析

4.1PCR反應(yīng)結(jié)束后，軟件會自動計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線和CT值等。

4.2如需進(jìn)行表達(dá)量分析、等位基因分析等，在軟件窗口選擇相應(yīng)分析功能。

4.3點(diǎn)擊右上方的“Report”鍵，還可輸出結(jié)果報告單（Excel）。

5、關(guān)閉運(yùn)行儀器

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后取出反應(yīng)管，順序關(guān)閉CFX Manager軟件、定量PCR儀電源，最后關(guān)閉電腦。