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在果蠅中，有一個(gè)比較著名的系統(tǒng)：UAS-Gal4系統(tǒng)。利用這個(gè)系統(tǒng)可以表達(dá)某一個(gè)基因。

這個(gè)系統(tǒng)需要兩種品系的果蠅，一種是Gal4品系的果蠅，另外一種是UAS品系的果蠅。下面我們來分別看一下這兩個(gè)品系的果蠅。

Gal4品系的果蠅：gal4是一個(gè)表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子的基因，這個(gè)基因最開始是在酵母中發(fā)現(xiàn)的，然后科學(xué)家把它在果蠅中特定的組織中進(jìn)行表達(dá)（沒看文獻(xiàn)，可能是把它克隆到某一個(gè)質(zhì)粒載體上，然后這個(gè)質(zhì)粒載體具有與想要進(jìn)行特定表達(dá)的染色體可以重組的位點(diǎn)）。

總之，就是它可以被插到染色體上，在它的上游具有增強(qiáng)子或者啟動(dòng)子，可以調(diào)節(jié)它在特異性的時(shí)間或者空間上進(jìn)行表達(dá)。

最近，師姐給我了一個(gè)actin-Gal4品系的driver line。

actin是肌動(dòng)蛋白，actin?是看家基因，在每個(gè)細(xì)胞中都進(jìn)行均一表達(dá)。所以我覺的這個(gè)品系應(yīng)該是把Gal4這個(gè)基因連到了actin的啟動(dòng)子的下游。

問題的關(guān)鍵來了，師姐告訴我這個(gè)品系是帶有TMB6平衡子的，讓我挑選直翅的果蠅和uas-RNAi品系的果蠅雜交。

我對(duì)平衡子一臉懵逼。就一步一步去查。

首先不同的果蠅具有不同的平衡子，有的果蠅具有平衡染色體，有的果蠅沒有，常用的帶有平衡染色體的果蠅有：

以下是從果蠅紅寶書上找到的幾種品系：

下面就以我得到的TM6B的品系的果蠅，我想看幼蟲時(shí)期的變化，所以主要以Tubby這個(gè)為主要的標(biāo)記。

首先得到帶有Tubby標(biāo)記的Gal4品系的果蠅：

現(xiàn)在得到的品系就是師姐給我的品系，我如果要與uas品系的果蠅進(jìn)行雜交就應(yīng)該篩選出Gal4的純合品系。

具體的篩選過程如下：

所以我需要挑選直翅的果蠅與下一代進(jìn)行雜交，如果要從幼蟲挑選的話，就挑選瘦的（沒必要）。

以上，解決了Gal4品系的問題。

下面是UAS品系的問題。

我是從清華大學(xué)果蠅中心購買的UAS-PPO2-RNAi品系。

我需要做的是了解這個(gè)品系的果蠅是如何構(gòu)建出來的，gal4轉(zhuǎn)錄因子與UAS結(jié)合之后不是啟動(dòng)靶基因的表達(dá)嗎？怎么最后又變成了RNAi。

gal4轉(zhuǎn)錄因子和UAS結(jié)合之后啟動(dòng)的靶基因是shmiRNA。

首先用于構(gòu)建UAS-RNAi品系的果蠅是含有attp位點(diǎn)的果蠅，我從清華大學(xué)果蠅中心的官網(wǎng)上下載的表格看到了我所敲的基因所用的載體是VALIUM 20，整合的位點(diǎn)是attp40.

（http://blog.sciencenet.cn/home.php?mod=space&uid=1076451&do=blog&id=1178913）

所以我又去下載了VALIUM20的質(zhì)粒圖譜。

可以看到這個(gè)質(zhì)粒上有attB位點(diǎn)，這個(gè)位點(diǎn)可以和果蠅染色體上的attP40發(fā)生整合，將這個(gè)shmiR插入到第二條染色體上?？梢钥吹皆谶@個(gè)質(zhì)粒中含有UAS位點(diǎn)。然后通過雜交，篩選出純合品系，我得到的應(yīng)該就是純合品系。

好了，現(xiàn)在兩個(gè)品系的問題都解決了，這下將兩個(gè)品系的果蠅進(jìn)行雜交。表達(dá)shmiRNA,應(yīng)該是一個(gè)發(fā)夾結(jié)構(gòu)的RNA.后面的步驟就和進(jìn)行RNAi的步驟是一樣的。

下面是朱玉賢的現(xiàn)代分子生物學(xué)這本書中的圖（考研的時(shí)候背的）：