Transwell實驗

定義:一類有通透性的杯狀裝置,可認為是一種膜濾器(Membrane filters),或者是一種通透性的支架(permeable supports)。

組成:杯子底層是一張有通透性的膜,杯子其余部分的材料與普通的孔板是一樣。這層膜帶有微孔,孔徑大小有0.1-12.0μm,根據(jù)不同需要可用不同材料,一般常用的是聚碳酸酯膜(polycarbonate membrane)。

原理:將Transwell小室放入培養(yǎng)板中,小室內(nèi)稱為上室,培養(yǎng)板內(nèi)成為下室,上室內(nèi)盛裝上層培養(yǎng)液,下室內(nèi)盛裝下層培養(yǎng)液,上下層培養(yǎng)液以聚碳酸酯膜相隔。細胞種在上室內(nèi),由于聚碳酸酯膜有通透性,下層培養(yǎng)液中的成分可以影響到上室內(nèi)的細胞,從而可以研究下層培養(yǎng)液中的成分對細胞生長、運動等的影響。

常用實驗:

(1)共培養(yǎng)體系

小于3.0um孔徑條件下,細胞不會遷徙通過,因此,若研究不涉及細胞運動能力,不需要細胞穿過聚碳酸酯膜,則應(yīng)選擇3.0μm以下孔徑。常用0.4、3.0μm。我們實驗室用的是0.4μm。將細胞A種于上室,細胞B種于下室,可以研究細胞B分泌或代謝產(chǎn)生的物質(zhì)對細胞A的影響。


(2)趨化性實驗

可用5.0、8.0、12.0μm膜,上室細胞可穿過聚碳酸酯膜進入下室,計數(shù)進入下室的細胞量可反映下室成分對上室細胞的趨化能力。

①細胞B(下室)對細胞A(上室)的趨化作用:將細胞A種于上室,細胞B種于下室,可以研究細胞B分泌或代謝產(chǎn)生的物質(zhì)對細胞A的趨化作用。

②趨化因子對細胞的趨化作用:將細胞種于上室,下室加入某種趨化因子,可研究該趨化因子對細胞的趨化作用。

(3)腫瘤細胞遷移實驗

常用8.0、12.0μm膜,原理與腫瘤細胞遷移實驗類似。

上室種腫瘤細胞,下室加入FBS或某些特定的趨化因子,腫瘤細胞會向營養(yǎng)成分高的下室跑,但與腫瘤細胞遷移實驗不同的是,聚碳酸酯膜上室側(cè)鋪上一層基質(zhì)膠,用以模仿體內(nèi)細胞外基質(zhì),細胞欲進入下室,先要分泌基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)將基質(zhì)膠降解,方可通過聚碳酸酯膜。計數(shù)進入下室的細胞量可反映腫瘤細胞的侵襲能力。

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