末端修飾那點(diǎn)事

T4 PNK (T4 Polynucleotide Kinase)T4多聚核苷酸激酶的功能

激酶:利用ATP,給底物加磷酸,是磷酸化酶

磷酸酶:將底物去磷酸化,是去磷酸化酶


總結(jié):

1:5’激酶作用(有ATP或則其它NTP前提條件下加磷酸)和磷酸酯酶作用

作用對象:在單鏈,雙鏈DNA,RNA,寡核苷酸,帶有3’磷酸基團(tuán)的單核苷酸

作用方式:5'-OH + NTP → 5'-P + NDP,

反應(yīng)可逆,在有NDP,缺失NTP時(shí)5'-P + NDP → 5'-OH + NTP(最適pH為6.4左右),當(dāng)兩者都有時(shí)5'-P + NTP + NDP→5'-P + NDP + NTP

此外,補(bǔ)充3'-P + NTP →3'-P -P+ NDP

2: 3’磷酸酯酶作用(最適ph5.9左右,注意購買T4 PNK產(chǎn)品時(shí)查看是否經(jīng)過修飾,即去除3’磷酸酶活性)

RNA 3'-P →3'-OH + Pi

DNA 3'-P → 3'-OH + Pi 或者3'-P-P →3'-OH + 2Pi

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