T4 PNK (T4 Polynucleotide Kinase)T4多聚核苷酸激酶的功能
激酶:利用ATP,給底物加磷酸,是磷酸化酶
磷酸酶:將底物去磷酸化,是去磷酸化酶

總結(jié):
1:5’激酶作用(有ATP或則其它NTP前提條件下加磷酸)和磷酸酯酶作用
作用對象:在單鏈,雙鏈DNA,RNA,寡核苷酸,帶有3’磷酸基團(tuán)的單核苷酸
作用方式:5'-OH + NTP → 5'-P + NDP,
反應(yīng)可逆,在有NDP,缺失NTP時(shí)5'-P + NDP → 5'-OH + NTP(最適pH為6.4左右),當(dāng)兩者都有時(shí)5'-P + NTP + NDP→5'-P + NDP + NTP
此外,補(bǔ)充3'-P + NTP →3'-P -P+ NDP
2: 3’磷酸酯酶作用(最適ph5.9左右,注意購買T4 PNK產(chǎn)品時(shí)查看是否經(jīng)過修飾,即去除3’磷酸酶活性)
RNA 3'-P →3'-OH + Pi
DNA 3'-P → 3'-OH + Pi 或者3'-P-P →3'-OH + 2Pi