? 1、驗(yàn)證microRNA同mRNA靶向互作。將待測基因的3’UTR序列插入報(bào)告基因載體，再共轉(zhuǎn)入該microRNA，檢測熒光素酶活性下降，則提示為其靶序列。

2、驗(yàn)證microRNA同lncRNA靶向互作。將待測lncRNA序列插入報(bào)告基因載體的3’UTR區(qū)域，檢測熒光素酶活性。

3、啟動子結(jié)構(gòu)分析。將啟動子區(qū)域(約2k左右)進(jìn)行分段截短或突變，構(gòu)建入報(bào)告基因載體，檢測熒光素酶活性。

4、啟動子SNP分析。一些基因的啟動子區(qū)域存在單核苷酸多態(tài)性，可運(yùn)用熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)分析其相對活性。

5、驗(yàn)證信號通路是否激活。將該信號通路的下游相應(yīng)原件序列構(gòu)建入報(bào)告基因載體，檢測不同上游條件下，其熒光素酶活性，即下游信號通路的響應(yīng)情況。

例子1

構(gòu)建pGreenH0800-PuGSTU17-LUC和pGreenI0800-PuPLA2-LUC載體

煙草瞬時(shí)激活實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證PuHSFA4a對下游基因PuGSTUI7和PuPLA2的瞬時(shí)激活

LUC酶活測定實(shí)驗(yàn)表明: PuHSFA4a能夠激活PuGSTU17和PuPLA2的啟動子導(dǎo)致

這兩個(gè)基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。? ? ?參考東北林業(yè)大學(xué)博士論文。2019-03

例子2

黃瓜原生質(zhì)體瞬時(shí)表達(dá)檢測下游基因啟動子活力?

為了明確CsATAF1對下游基因的激活或抑制作用，利用煙草葉片注射和黃瓜原生質(zhì)體瞬時(shí)轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，對下游基因的激活進(jìn)行檢測，結(jié)果表明，CsATAF1激活了CsDREB2C, CsCu-ZnSOD， CsABI5的表達(dá)， 促進(jìn)了下游報(bào)告基因的表達(dá)。

例子3：

轉(zhuǎn)錄激活實(shí)驗(yàn)

?完整的ALMTI啟動子(P1) 和5'端缺失的啟動子(P2)被克隆后構(gòu)建到報(bào)告載體中(如圖5-11b), 分別與35S啟動子帶動的WRKY46一起侵染煙草葉片。結(jié)果顯示，WRKY46明顯抑制由完整ALMTI啟動子(P1) 帶動的熒光素酶的活性，但不影響5'端缺失的啟動子(P2) 帶動的熒光素酶活性， 說明缺失的啟動子序列(含6個(gè)W-box 元件)對WRKY46與ALMTI啟動子的相互作用至關(guān)重要。

例子4

例子5---啟動子結(jié)構(gòu)分析。將啟動子區(qū)域(約2k左右)進(jìn)行分段截短或突變，構(gòu)建入報(bào)告基因載體，檢測熒光素酶活性。

蘋果U6啟動子的克隆及功能分析

本試驗(yàn)以pYLsgRNA-At U6-1質(zhì)粒為模板克隆長度為301 bp的At U6-1啟動子（表1），并連接至p GreenII-0800-LUC載體，命名為At U6-1P::LUC。不同U6啟動子驅(qū)動熒光素酶基因的融合表達(dá)載體示意圖如圖

U6啟動子驅(qū)動LUC報(bào)告基因的融合表達(dá)載體構(gòu)建

詳細(xì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果參考：蘋果U6啟動子的克隆及功能分析 - 中國知網(wǎng)

例子6

然后分別取材按照雙熒光素酶試劑盒試驗(yàn)步驟測量不同樣品中LUC及REN的熒光值并計(jì)算每種樣品中LUC/REN比值。結(jié)果發(fā)現(xiàn)a組與b組熒光比值都很低，說明試驗(yàn)操作及煙草生長狀態(tài)良好。而d組相對于c組比值下降了3.5 倍左右，說明轉(zhuǎn)錄因子AtMYB32抑制AtGA20oxl的表達(dá)(圖2.6B)。通過分析過表達(dá)株系中AtGA20ox1基因的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)過表達(dá)株系中AtGA20ox1基因的表達(dá)相對于野生型來說均有不同程度的下降，進(jìn)一步驗(yàn)證了轉(zhuǎn)錄因子AtMYB32對AtGA20oxl的抑制作用(圖2.6C)。