上期推文中，我強調了熒光共定位定量分析的三大要點?！?a target="_blank">【操作篇】熒光共定位的定量分析！

①?散點圖

②?皮爾遜相關系數(shù)

③?重疊系數(shù)（也稱為共定位系數(shù)）

皮爾遜相關系數(shù)和重疊系數(shù)其實是Image Pro Plus根據(jù)散點圖進行回歸分析計算得到的。

因此，解讀散點圖成為重中之重，也是發(fā)表論文時必須報告出來的。

▼ 1.為什么要分析散點圖？

其實最開始定量分析共定位是采用劃線法。

IPP把人為劃定的線條上的紅色通道、綠色通道強度值轉換為波形圖（如下）。

很快，大家注意到這條人為劃定的線不靠譜，線段的位置和長短不同，右側的波形肯定也會變化。這種局部測量波形圖給造假者留下了空間。

于是，散點圖出現(xiàn)了。

將整張圖中所有熒光點納入，分離為紅色通道和綠色通道，然后根據(jù)兩個通道的強度（也就是灰度）生成散點圖，并計算相關系數(shù)。

這樣就造不了假，只要圖片不變，散點分布是無法被人為操縱。

▼ 2. 散點圖有哪些信息？

（2.1）如果蛋白A（紅色通道）和蛋白B（綠色通道）存在一定的共定位關系，那么散點圖中的散點分布會呈現(xiàn)3種形態(tài)。

● 形態(tài)1：

總體呈棒槌狀，基本線性分布，靠近Y軸（綠色通道）。

說明：蛋白A和蛋白B存在一定的共定位關系，但蛋白A熒光強度高于蛋白B。

● 形態(tài)2：

總體呈直棒形狀，線性分布，對角分布。

說明：蛋白A和蛋白B存在很強的共定位關系，且蛋白A熒光強度與蛋白B基本相當。

●?形態(tài)3：

總體呈棒槌狀，基本線性分布，靠近X軸（紅色通道）。

說明：蛋白A和蛋白B存在一定的共定位關系，但蛋白B熒光強度高于蛋白A。

（2.2）如果蛋白A（紅色通道）和蛋白B（綠色通道）的共定位關系很弱，那么散點圖中的散點分布會呈現(xiàn)以下內凹形態(tài)，這。

（2.3）散點圖中4代表的是共定位熒光圖像中的背景熒光，該區(qū)域內散點越多，說明背景熒光越強，散點圖中會呈現(xiàn)以下形態(tài)。

下期預告：單通道熒光的散點圖獲取