? ? ? ? 想想單鏈DNA（single strand DNA）有啥用？猛的一想，可能大腦一片空白。而實際上，在諸如PCR引物，外顯子測序中中捕獲探針，RNA/DNA FISH中的雜交探針，Northern/Southern blot中的雜交探針，CRISPR/Cas9中的同源修復模板等等都需要ssDNA。當然，大部分情況下，直接進行化學合成是獲取ssDNA最為快速高效的方式。但這種化學合成的策略同時面臨著序列越長成本越高，重復序列越多越難合成的問題。因此，開發(fā)新的ssDNA，尤其是針對長ssDNA的合成方法顯得尤為重要。以下我們將分享一些神奇的單鏈DNA合成技術(shù)。

? ? ? ? 今天介紹第一種，基于不對稱PCR（asymmetric PCR）的單鏈DNA合成技術(shù)。

? ? ? ? 不對稱PCR是利用不等量的一對引物來產(chǎn)生大量單鏈DNA (ssDNA)的方法。常規(guī)PCR中我們使用的正向和反向引物是等量的，因此擴增產(chǎn)生的兩條ssDNA是等量的；如果只想獲得其中一條ssDNA，則可以通過調(diào)整正反向引物的量實現(xiàn)。經(jīng)過不對稱PCR獲得的是ssDNA和dsDNA的混合物，可以通過瓊脂糖凝膠電泳進行分離純化。

asymmetric PCR