可編程細(xì)菌誘導(dǎo)持久的腫瘤消退和全身抗腫瘤免疫
原文鏈接：
https://www.nature.com/articles/s41591-019-0498-z
摘要
細(xì)菌作為治療性傳遞系統(tǒng)的工具，可以選擇性地釋放體內(nèi)治療有效載荷。
設(shè)計(jì)了一種非致病性大腸桿菌菌株，在腫瘤微環(huán)境中特異性裂解并釋放CD47（CD47nb）的編碼納米抗體拮抗劑.
CD47nb是一種抗吞噬細(xì)胞受體，通常在幾種人類癌癥類型中過表達(dá)。結(jié)果顯示腫瘤定植細(xì)菌的CD47nb的遞送增加了腫瘤浸潤性T細(xì)胞的活化，刺激腫瘤快速消退，防止轉(zhuǎn)移并導(dǎo)致小鼠的同系腫瘤模型中的長期存活。
此外，局部注射CD47nb表達(dá)菌可刺激全身腫瘤抗原特異性免疫反應(yīng)，從而降低未治療腫瘤的生長，這為工程細(xì)菌免疫治療引起的局部效應(yīng)提供了概念證明。因此，工程菌可用于安全、局部的免疫治療有效載荷傳遞，誘導(dǎo)全身抗腫瘤免疫。
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CD47 背景知識(shí)
CD47是一種廣泛表達(dá)于多種癌細(xì)胞表面的糖蛋白，被行業(yè)喻為PD-(L)1之后，腫瘤免疫領(lǐng)域的下一個(gè)“明星”。作為抗腫瘤免疫治療領(lǐng)域的熱門靶點(diǎn)，CD47是機(jī)體免疫抑制信號(hào)通路的關(guān)鍵成員之一，不同于程序性細(xì)胞死亡蛋白1（PD-1）、PD-1配體1（PD-L1）、細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)蛋白4（CTLA-4）等作用于T細(xì)胞免疫檢測(cè)點(diǎn)抑制信號(hào)，CD47主要通過與腫瘤吞噬細(xì)胞表面的抑制性受體信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白α（SIRPα）作用釋放“別吃我”信號(hào)，從而抑制巨噬細(xì)胞的吞噬作用，并介導(dǎo)多種惡性腫瘤免疫逃逸機(jī)制。
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納米抗體
鯊魚、駱駝和羊駝等動(dòng)物身上有一種微型疫苗，比普通疫苗少了兩條蛋白質(zhì)鏈。理論上，疫苗的尺寸越小，其穿透力就越好。于是科學(xué)家將微型疫苗進(jìn)一步簡化，只提取其具有抗原結(jié)合能力的那部分，做成了尺寸更小的納米疫苗。納米疫苗最初是用于蛋白質(zhì)成像，因?yàn)槠淠芊€(wěn)定住實(shí)時(shí)發(fā)生形變的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，從而方便了觀察研究。后來納米疫苗又被用于細(xì)胞內(nèi)促進(jìn)或阻止兩種蛋白質(zhì)的結(jié)合。隨著納米疫苗生產(chǎn)技術(shù)的發(fā)展，未來生物學(xué)家將能更方便地從酵母中提取大量納米疫苗，使納米疫苗被廣泛用于治療狼瘡和肺部纖維化，以及用于癌細(xì)胞成像和給大腦遞送藥物成為可能
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CD47 nanoantibody: https://www.pnas.org/content/113/19/E2646
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系統(tǒng)構(gòu)建
Step1: pSC01 SLC plasmid：
The pSC01 SLC plasmid was constructed by first amplifying a region that contained the constitutively expressed luxR gene and phage lysis gene, ?X174E under the control of the luxI promoter from a pZA35E plasmid8. Next, this region was cloned into a pTD103-luxI plasmid27 using the AvrII site.
Step 2: pSC02 therapeutic plasmid：
pSC02 therapeutic plasmid was constructed by cloning a gBlock (IDT) encoding a tac promoter and an E. coli codon-optimized sequence for the A4 anti-CD47 nanobody12 with an C-terminal HA tag into the multiple cloning site of a pAH162 plasmid41. Additionally, two stabilizing elements, the hok/sok system42 and alp7 partitioning system43 were introduced into pSC02 to minimize plasmid loss in vivo.
Step 3： pSC01 and pSC02 were transformed into chemically competent E. coli Pir1+ (Invitrogen)
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腫瘤治療效果如何？
看著還是很NB,但其實(shí)機(jī)制還不是完全清楚啊，不僅加了個(gè)細(xì)菌進(jìn)去，還把細(xì)菌裂解了， 除了CD47nb,其他細(xì)菌成分引起的免疫反應(yīng)多了去了。。。。，應(yīng)用與臨床也有待考量。。
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想法很多：
細(xì)菌+腫瘤免疫
病毒+腫瘤免疫
溶瘤病毒就是利用微生物作為癌癥治療的首批成功嘗試之一，不少藥物已獲批上市，臨床實(shí)驗(yàn)也進(jìn)行的如火如荼， “溶瘤菌”未來可期
T Cell， Dentric cell， Macrophage， NK Cell
Check Point, CAR-T..........
還有什么可以跟腫瘤免疫結(jié)合？
