2018-10-16 細(xì)胞活性的檢測方法比較

細(xì)胞活性的定義具有多樣性,通過對關(guān)鍵的細(xì)胞生理指標(biāo)進(jìn)行標(biāo)記來進(jìn)行檢測,如細(xì)胞代謝的活性(酯酶的功能,MTT法)、凋亡標(biāo)記物(Annexin V)、細(xì)胞氧化還原電位、膜電位、增值率(DNA含量)、線粒體功能和膜的完整性等。
目前被廣泛使用的標(biāo)準(zhǔn)是基于對細(xì)胞膜的完整性和相關(guān)的染料排斥發(fā)檢測。常用染料有臺盼藍(lán)、碘化丙啶,需要設(shè)備有血球計數(shù)板、熒光顯微鏡、流式細(xì)胞儀、成像技術(shù)儀

臺盼藍(lán)拒染法

  • 收集細(xì)胞后用PBS清洗細(xì)胞,血清中蛋白也能被臺盼藍(lán)結(jié)合,在流式細(xì)胞儀660nm處可以被檢測到。
  • 染色3-5min內(nèi)應(yīng)完成計數(shù),時間越長,細(xì)胞死的越多
    900ul 細(xì)胞懸液+100ul 0.4%臺盼藍(lán)染料,輕輕吹打混勻,室溫染色3min,取10ul用血球計數(shù)板/細(xì)胞計數(shù)儀計數(shù)。
    正常傳代的細(xì)胞活性應(yīng)該在95%以上。
    缺點: 手工計數(shù)過程費(fèi)時費(fèi)力,系統(tǒng)誤差較大。

碘化丙啶(Propidium Iodidi,PI)染色

細(xì)胞樣本用5μg/ml的PI染色(Life Technologies),孵育5min,所有染色后的樣本在20min內(nèi)完成檢測,所有分析操作均在Moxi Flow儀器上進(jìn)行。

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