FluoTag-Q抗GFP來(lái)源于一種內(nèi)部開(kāi)發(fā)的單域抗體（sdAb），它能夠以高親和力和特異性識(shí)別GFP及其最常見(jiàn)的衍生物。
生物和生物發(fā)光領(lǐng)域的突破始于20世紀(jì)60年代，當(dāng)時(shí)下村修及其同事從水母Aequorea victoria中發(fā)現(xiàn)了一種發(fā)光蛋白。然而，直到20世紀(jì)90年代初，綠色熒光蛋白（GFP）序列才被克隆，并作為一種熒光標(biāo)記在異源生物體中使用。如今，在一個(gè)開(kāi)源數(shù)據(jù)庫(kù)中可以找到超過(guò)800條各種熒光蛋白的記錄，其中目前可用的變體在熒光蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)“fpbase”中。
FluoTags可以配備單個(gè)熒光團(tuán)以實(shí)現(xiàn)更定量的讀出（FluoTag-Q），每個(gè)單域抗體可以結(jié)合兩個(gè)熒光團(tuán)（FluoTag-X2），NanoTag還開(kāi)發(fā)了一種混合兩種sdAb的結(jié)合物，它們同時(shí)與目標(biāo)蛋白結(jié)合，每個(gè)都帶有兩個(gè)熒光團(tuán)（FluoTag-X4）。
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艾美捷FluoTag-X4抗GFP AbberiorStar460：
貨號(hào)：N0304-Ab460-L
克隆號(hào)：1H1
宿主：羊駝
生產(chǎn)來(lái)源：大腸桿菌
應(yīng)用：免疫熒光（IF）
注意：不建議使用該品進(jìn)行Western blot檢測(cè)蛋白質(zhì)，因?yàn)閟dAb主要識(shí)別天然/折疊的蛋白質(zhì)。
稀釋比例：1:1000（相當(dāng)于最終濃度為5 nM）
靶標(biāo)：GFP
特異性：識(shí)別GFP（綠色熒光蛋白）和常見(jiàn)的GFP衍生物，如EGFP、mEGFP、Sirius、tSapphire、Cerulean、eCFP、mTurquoise、acGFP、Emerald、超橢圓pHluorin、paGFP、superfolder GFP、eYFP、mVenus和Citrine?？赡芤沧R(shí)別尚未測(cè)試的其他衍生物。
配方：從含有2% BSA（美國(guó)來(lái)源）的PBS（pH 7.4）中凍干單個(gè)sdAb克隆。用200 μL去離子水中的50%甘油復(fù)溶。如果適用，建議添加0.1%疊氮化鈉作為防腐劑。復(fù)溶后濃度為5 μM。
儲(chǔ)存：含有凍干蛋白的安瓿可在4°C下保存6個(gè)月。建議用含有0.1%疊氮化鈉防腐劑的50%無(wú)菌甘油水溶液復(fù)溶蛋白。通過(guò)分裝復(fù)溶蛋白以減少凍融循環(huán)次數(shù)。長(zhǎng)期保存在-80°C下，最長(zhǎng)可達(dá)6個(gè)月。工作分裝可在-20°C下保存長(zhǎng)達(dá)4周。不建議將復(fù)溶后的蛋白在4°C下保存。
注意事項(xiàng)：僅用于體外/研究目的。無(wú)毒、無(wú)害、無(wú)傳染性。
使用FluoTag-Q Atto 647N抗GFP sdAb（貨號(hào)N0301-At647N，稀釋比例1:500）對(duì)表達(dá)TOM70-GFP報(bào)告蛋白的PFA固定3T3細(xì)胞進(jìn)行免疫染色（GFP信號(hào)以綠色表示，相應(yīng)的FluoTag信號(hào)以紅色表示，兩個(gè)通道的合并以黃色表示）。細(xì)胞核通過(guò)DAPI染色（藍(lán)色）可視化。
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文獻(xiàn)參考：
de Jong-Bolm D, Sadeghi M, Bogaciu CA, et al. Protein nanobarcodes enable single-step multiplexed fluorescence imaging. PLoS Biol. 2023;21(12):e3002427. Published 2023 Dec 11. doi:10.1371/journal.pbio.3002427 (IF; HEK293)
Shaib AH, Chouaib AA, Chowdhury R, et al. One-step nanoscale expansion microscopy reveals individual protein shapes. Nat Biotechnol. Published online October 9, 2024. doi:10.1038/s41587-024-02431-9
Candelas Serra M, Kuchtiak V, Kubik-Zahorodna A, et al. Characterization of Mice Carrying a Neurodevelopmental Disease-Associated GluN2B(L825V) Variant. J Neurosci. 2024;44(31):e2291232024. Published 2024 Jul 31. doi:10.1523/JNEUROSCI.2291-23.2024 (Cat. No. N0301-Ab635P-L; IF; STED; mouse hippocampal neurons)
