學(xué)習(xí)內(nèi)容：

• 一代、二代、三代測序
• 二代測序的大體流程

• NGS組學(xué)都包含哪些分類

  
  
  
  

原理理解

一代測序（桑格爾-雙脫氧鏈終止法）：利用一種DNA聚合酶來延伸結(jié)合待定序列模板上的引物，直到參入一種鏈終止核苷酸為止，反應(yīng)體系1-4---引物、DNA聚合酶、四種dNTP。

二代測序（循環(huán)陣列合成測序法）：將基因組DNA的隨機(jī)片段附著到光學(xué)透明的玻璃表面（Flowcell），這些DNA片段經(jīng)過延伸和橋式擴(kuò)增后，在Flow cell上形成數(shù)以億計(jì)Cluster，每一個Cluster是具有數(shù)千份相同模板的單分子簇，然后利用帶熒光基團(tuán)的四種特殊脫氧核糖核苷酸，通過可逆性終止的邊合成邊測序技術(shù)對待測的模板DNA進(jìn)行測序。

二代測序流程（illumina測序）

1、DAN文庫構(gòu)建（sample preparation），利用超聲波把DNA樣本打斷成小片段，小片段兩端加上不同的接頭，構(gòu)建單鏈DNA文庫。
2、Flowcell, 用于吸附DNA片段的槽道，文庫中的DNA在通過Flowcell的時(shí)候會隨機(jī)附著在Flowcell的表面的泳道上，泳道表面都附著有很多接頭，能和建庫過程中加載DNA片段的兩端接頭相互配對，并能支持DNA在其表面進(jìn)行橋式PCR擴(kuò)增。
3、橋式PCR擴(kuò)增與變性，橋式PCR以Flowcell表面所固定的接頭為模板，進(jìn)行橋形擴(kuò)增，通過不斷的擴(kuò)增和變性，最終每個DNA片段都將在各自的位置上集中成束。
4、測序，邊合成邊測序，反應(yīng)體系（DNA聚合酶、接頭引物、帶有堿基特異熒光標(biāo)記的4種dNTP），收集熒光信號，最后利用計(jì)算機(jī)分析將熒光信號轉(zhuǎn)化為測序堿基。

今天學(xué)習(xí)測序相關(guān)的知識，也是一直想學(xué)的，但是沒有好好認(rèn)真去學(xué)習(xí)的，可能真正理解還需要一些時(shí)間。