糖皮質(zhì)激素間接誘導(dǎo)microRNA-708以RaplB為靶標(biāo)抑制卵巢癌的轉(zhuǎn)移
文獻(xiàn)影響因子：12
一、文獻(xiàn)的研究思路
MicroRNA-708在卵巢癌細(xì)胞中表達(dá)量很低，當(dāng)細(xì)胞受到糖皮質(zhì)激素（GC）的刺激后，GC誘導(dǎo)GRα結(jié)合到miR-708的啟動(dòng)子區(qū)促進(jìn)miR-708的表達(dá)，隨后miR-708與Rap-1B mRNA的3’-UTR區(qū)結(jié)合抑制mRNA翻譯表達(dá)，Rap-1B是腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的重要標(biāo)志蛋白，Rap-1B表達(dá)受到抑制后會(huì)抑制細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。
二、核心實(shí)驗(yàn)和結(jié)果
作者首先通過microRNA的表達(dá)微陣列和用q-pcr檢測(cè)microRNA708的表達(dá)篩選出在轉(zhuǎn)移性卵巢癌細(xì)胞中異常低表達(dá)的miR-708，后續(xù)研究就是圍繞miR-708進(jìn)行。對(duì)miR-708的研究作者分別進(jìn)行功能和機(jī)制的研究。
機(jī)制實(shí)驗(yàn)的核心包括三個(gè)部分的內(nèi)容：
1.是miR-708的表達(dá)調(diào)控：作者用DEX處理細(xì)胞后檢測(cè)miR-708和Odz4 RNA的表達(dá)說明miR-708和Odz4共轉(zhuǎn)錄形成；然后通過ChIP實(shí)驗(yàn)說明糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)GRα結(jié)合到MIR708*基因啟動(dòng)子上促進(jìn)miR-708的表達(dá)。
圖A為MIR708和ODZ4基因在基因組上的位置；圖B為用DEX處理細(xì)胞后檢測(cè)miR-708的Odz4的表達(dá)，兩者的表達(dá)受DEX的影響一致；圖C為ChIP實(shí)驗(yàn)結(jié)果，說明了DEX處理使GR結(jié)合到基因啟動(dòng)子上增加。
2.是驗(yàn)證MiR-708與Rap1B mRNA的3’-UTR互作抑制Rap1B的表達(dá)。如下圖，作者先通過Q-PCR和WB檢測(cè)miR-708對(duì)Rap1B表達(dá)的影響，然后用熒光素酶實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證MiR-708與Rap1B mRNA 4’-UTR的互作關(guān)系。
圖A是生物信息學(xué)預(yù)測(cè)與Rap1B相關(guān)的microRNA的維恩圖；圖B是q-pcr檢測(cè)miR-708轉(zhuǎn)染細(xì)胞、miR-708和其反向互補(bǔ)序列共轉(zhuǎn)染細(xì)胞后的Rap1B的mRNA表達(dá)；圖C是WB檢測(cè)miR-708轉(zhuǎn)染細(xì)胞、miR-708和其反向互補(bǔ)序列共轉(zhuǎn)染細(xì)胞后的Rap1B蛋白的表達(dá)；圖D是3’-UTR熒光素酶實(shí)驗(yàn)，表明了miR-708通過與Rap1B mRNA的3’-UTR互作抑制蛋白的表達(dá)。
3.粘附因子的形成與細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)，本文的第三個(gè)核心實(shí)驗(yàn)就是驗(yàn)證miR-708和Rap1B對(duì)細(xì)胞粘附因子形成的影響。作者通過用纖連蛋白包被細(xì)胞爬片后的免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞骨架蛋白來監(jiān)測(cè)細(xì)胞粘附因子的形成情況，如下圖：
圖A為蛋白免疫熒光實(shí)驗(yàn)的結(jié)果圖；圖B-E為Fas形成的細(xì)胞數(shù)量和密度、細(xì)胞的傳播、每個(gè)細(xì)胞的粘附因子密度的統(tǒng)計(jì)，說明了miR-708的表達(dá)和Rap1B的敲低度細(xì)胞粘附因子形成是負(fù)調(diào)控的。
參考文獻(xiàn)：Kai-Ti Lin,Yu-Ming Yeh,Chi-Mu Chuang,et al. Glucocorticoids mediateinduction of microRNA-708 to suppress ovarian cancer metastasis throughtargeting Rap1B[J].NATURE COMMUNICATIONS,2014,6:5917
