????轉錄組測序是最常用的組學實驗,對全譜基因定量,找到差異表達基因。RNAseq涉及到原始數(shù)據(jù),數(shù)據(jù)質控,基因組比對,差異基因鑒定,差異基因功能富集分析,重要基因如轉錄因子激酶的靶基因預測等,我們用10講的時間,全面講解轉錄組測序報告,及在上百個項目中遇到的近百個常見問題。
????本節(jié)視頻是第1講,從測序原始下機數(shù)據(jù)開始講起。樣品制備到產(chǎn)出測序數(shù)據(jù)過程,是RNA提取建庫和測序的試驗環(huán)節(jié)。在使用Illumina系列的儀器進行測序后,測序下機數(shù)據(jù)以fastq文件存儲,稱為raw data(或raw reads),記錄了轉錄組RNA序列的堿基組成信息。
本節(jié)內(nèi)容要點包括:
(1)如何查看fastq文件;
(2)fastq文件的基本格式,每一行的主要信息;
(3)如何在fastq文件中評估堿基質量,代表堿基質量的ASCII值和單堿基測序錯誤率之間怎樣換算;
(4)N堿基代表什么,常說的Q20、Q30等與測序質量間存在怎樣的關系,一般它們多少時代表測序質量是合格的;
(5)為什么一個樣本對應R1和R2兩個fastq文件,什么是雙端測序。
視頻教程:
紀偉講測序1-測序原始數(shù)據(jù)說明
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