原理
感受態(tài)是指受體細胞易接受外源DNA片段并實現(xiàn)其轉(zhuǎn)化的一種生理狀態(tài)。感受態(tài)由受體細胞的遺傳性狀所決定的，受菌齡、外界環(huán)境因子的影響。

Ca2+存在可大大促進轉(zhuǎn)化的作用，新鮮，幼嫩的細胞是選擇做感受態(tài)細胞的佳材料。

感受態(tài)細胞在0℃，CaCl2的低滲溶液中，菌細胞膨脹成球形，而轉(zhuǎn)化混合物中的DNA形成抗DNase（DNA酶）的羥基--鈣磷酸復(fù)合物，并粘附于細胞表面，經(jīng)42℃短時間熱沖擊處理，可促使細胞迅速收縮，吸收DNA復(fù)合物，完成轉(zhuǎn)化。

準備工作
LB液體/固體培養(yǎng)基、DH5a菌株/感受態(tài)、0.1M Cacl2 與15% 甘油（滅菌）（配制0.1M Cacl2 與15% 甘油時，若配制50ml，則計算得知需要甘油7.5ml ，Cacl2 0.735g。先加Cacl2與甘油，加完后ddH2O定容至50ml）、滅菌濾紙。

步驟
1.于超凈將DH5a菌株劃線至LB 固體培養(yǎng)基，37°培養(yǎng)過夜；
2.于超凈挑單菌落至5ml LB液體培養(yǎng)基，37°搖床培養(yǎng)過夜；
3.于超凈取1ml 菌液轉(zhuǎn)接至50ml LB液體培養(yǎng)基（提前滅菌50ml LB液體培養(yǎng)基＋錐形瓶），37°搖床培養(yǎng)約2-2.5h至OD600=0.5左右（需要在超凈中吸取1mlLB對照和1ml 菌液，LB作為blank）；
4.于超凈將菌液轉(zhuǎn)至新的50ml離心管，冰浴10min（冰要沒過離心管）；
5.離心機預(yù)冷，4° 4000rpm，10min 集菌；
6.于超凈中棄上清，倒置于滅菌濾紙上1min，待上清液濾干；
7.加入10ml 0.1M Cacl2（提前預(yù)冷且滅菌）重懸菌體，輕柔洗吹，冰浴30min；
8.重復(fù)離心集菌棄上清，倒置于滅菌濾紙上，待上清液濾干；
9.加入2.5ml 0.1M Cacl2+15%甘油（提前預(yù)冷且滅菌）重懸沉淀，輕柔洗吹，分裝100 μL 每管至滅菌的1.5ml離心管中，液氮速凍，-80°保存。

注意事項
1.為制備轉(zhuǎn)化效率較高的感受態(tài)細胞，可將保菌液經(jīng)劃線和二次培養(yǎng)以后用于制作感受態(tài)細胞。
2.注意挑取LB固體培養(yǎng)基上濕潤，圓滑的克隆，以防挑取雜菌。
3.制作感受態(tài)的過程中盡量冰上操作，操作的動作盡量輕柔，穩(wěn)??；試驗中所用的試劑，轉(zhuǎn)子，離心機需要提前預(yù)冷。