本文旨在系統(tǒng)介紹一種常用于流式細(xì)胞術(shù)等免疫檢測(cè)實(shí)驗(yàn)的重組蛋白試劑——全藻藍(lán)蛋白標(biāo)記親和純化山羊抗人IgGFcγ片段特異性抗體(貨號(hào):109-135-098)。內(nèi)容涵蓋其核心特性、結(jié)構(gòu)組成、特異性、標(biāo)記物特點(diǎn)、使用方法及注意事項(xiàng),為科研人員提供一份清晰、全面的技術(shù)參考。
Jackson 總部位于美國(guó)賓夕法尼的蘭卡斯特,距離費(fèi)城大概有40英里。Jackson在1982年由科學(xué)家展開了包括在細(xì)胞生物學(xué),蛋白質(zhì)化學(xué),微生物學(xué),免疫學(xué)及產(chǎn)品開發(fā)實(shí)驗(yàn)研究。 Jackson產(chǎn)品僅用于研究,不用于診斷或治療用途。作為美國(guó)各種二抗生產(chǎn)公司之一,Jackson在各國(guó)設(shè)有幾十家代理。由于其產(chǎn)品效價(jià)高、種類全、價(jià)格低廉,因而成為各大藥廠、試劑盒生產(chǎn)廠、大型實(shí)驗(yàn)室采購(gòu)此類試劑的優(yōu)選。其產(chǎn)品主要包括:各種純化的二抗、標(biāo)記的二抗(AMCA、 Cy2、FITC、Cy3、TRITC、RRX、TR、Cy5、長(zhǎng)臂生物素、辣根酶和堿磷酶標(biāo)記)等。
一、產(chǎn)品核心特性
這是一種以山羊?yàn)樗拗鳟a(chǎn)生的多克隆抗體,經(jīng)過免疫親和層析純化,獲得完整的免疫球蛋白G分子。
靶標(biāo)特異性:該抗體特異性地識(shí)別并結(jié)合人免疫球蛋白G的Fcγ片段。通過免疫電泳和/或ELISA方法驗(yàn)證,它僅與IgG重鏈的Fc部分發(fā)生反應(yīng),而不與Fab片段結(jié)合。這使其成為研究人IgG非常精準(zhǔn)的工具。
交叉反應(yīng)性:經(jīng)過嚴(yán)格測(cè)試與固相吸附處理,該抗體與牛、馬、小鼠的血清蛋白的交叉反應(yīng)性極低。這保證了在含有這些物種血清的復(fù)雜樣本(如細(xì)胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液)中進(jìn)行檢測(cè)時(shí),背景信號(hào)得以有效控制。但需注意,它仍可能與其他物種的免疫球蛋白發(fā)生交叉反應(yīng)。
抗體形式:該產(chǎn)品為全I(xiàn)gG抗體。這意味著它是從抗血清中分離出的完整抗體分子,包含一個(gè)Fc片段和兩個(gè)通過二硫鍵連接的抗原結(jié)合Fab片段,因此是二價(jià)的。其分子量約為160kDa。全I(xiàn)gG抗體形式適用于絕大多數(shù)免疫檢測(cè)實(shí)驗(yàn),并且通常是最具成本效益的選擇。
二、標(biāo)記物:藻藍(lán)蛋白
該抗體的標(biāo)記物為藻藍(lán)蛋白,這是一種性能優(yōu)異的熒光染料。
來(lái)源與性質(zhì):APC是從藍(lán)藻(如螺旋藻)中提取的一種藻膽蛋白,經(jīng)過化學(xué)交聯(lián)以增強(qiáng)穩(wěn)定性。其最大激發(fā)波長(zhǎng)約為650nm,最大發(fā)射波長(zhǎng)約為660nm。
熒光優(yōu)勢(shì):
高熒光強(qiáng)度:與傳統(tǒng)的有機(jī)熒光染料相比,藻膽蛋白與抗體偶聯(lián)后熒光淬滅效應(yīng)很小,能形成具有高特異性熒光強(qiáng)度的復(fù)合物。
寬激發(fā)范圍:APC在可見光光譜范圍內(nèi)有較寬的激發(fā)窗口,便于使用常見的流式細(xì)胞儀激光器(如紅色激光器)進(jìn)行激發(fā)。
良好水溶性:APC具有高水溶性和相對(duì)較低的等電點(diǎn),這有助于減少非特異性結(jié)合。同時(shí),它不含容易產(chǎn)生粘附的碳水化合物,進(jìn)一步降低了背景干擾。
應(yīng)用考量:需要注意的是,APC的分子量相對(duì)較大,這可能會(huì)限制其在需要良好組織或細(xì)胞穿透性的實(shí)驗(yàn)(如某些組織的深層免疫熒光染色)中的應(yīng)用。因此,它主要設(shè)計(jì)用于細(xì)胞表面標(biāo)志物的標(biāo)記,是流式細(xì)胞分析的理想選擇。
三、產(chǎn)品使用指南
正確的保存、復(fù)溶和使用是確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠的關(guān)鍵。
1.物理狀態(tài)與儲(chǔ)存:
*產(chǎn)品以凍干固體形式提供。
*在復(fù)溶前,應(yīng)于2-8°C條件下儲(chǔ)存凍干粉末。
2.復(fù)溶與保存:
*使用指定體積的超純水復(fù)溶凍干粉末。具體體積請(qǐng)參閱產(chǎn)品說(shuō)明書。
*復(fù)溶后若溶液不澄清,可進(jìn)行離心處理。
*復(fù)溶后的液體應(yīng)儲(chǔ)存于2-8°C,切勿再次冷凍。
*復(fù)溶后產(chǎn)品的有效期為六個(gè)月。如果經(jīng)過測(cè)試,結(jié)果仍能滿足實(shí)驗(yàn)要求,有效期可能適當(dāng)延長(zhǎng)。
3.工作濃度與稀釋:
建議工作稀釋范圍為1:50至1:200。
*必須強(qiáng)調(diào)的是,最佳稀釋倍數(shù)受多種因素影響,包括目標(biāo)抗原的密度、細(xì)胞膜通透性等。因此,建議使用者在實(shí)際實(shí)驗(yàn)體系中通過預(yù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行經(jīng)驗(yàn)性優(yōu)化,以確定最適合自己實(shí)驗(yàn)條件的稀釋比例。
*工作稀釋液應(yīng)在使用當(dāng)天新鮮配制,以確保熒光強(qiáng)度和活性的穩(wěn)定。
4.緩沖液與添加劑:
緩沖體系:0.01M磷酸鈉,0.25MNaCl,pH7.6。
穩(wěn)定劑:含有15mg/ml的牛血清白蛋白,該BSA經(jīng)過處理,不含IgG和蛋白酶,有助于維持抗體的長(zhǎng)期穩(wěn)定性。
防腐劑:添加了0.05%的疊氮化鈉,用以抑制微生物生長(zhǎng)。使用者需注意,疊氮化鈉會(huì)干擾某些依賴于活細(xì)胞代謝的實(shí)驗(yàn)(如部分細(xì)胞功能assays),并且在處理廢液時(shí)應(yīng)遵循相應(yīng)的安全規(guī)范。
四、應(yīng)用領(lǐng)域與產(chǎn)品類別
此產(chǎn)品歸屬于“用于流式細(xì)胞術(shù)的全I(xiàn)gGR-PE,APC,PerCP及其他標(biāo)記物偶聯(lián)物”類別。其核心應(yīng)用是利用APC的熒光特性,通過流式細(xì)胞術(shù)對(duì)表達(dá)人IgGFcγ片段的細(xì)胞或分子進(jìn)行檢測(cè)、分選和定量分析。由于其高特異性和低背景,它特別適用于多重流式分析,可與標(biāo)記了其他熒光染料(如FITC,PE等)的抗體搭配使用,同時(shí)檢測(cè)多個(gè)靶標(biāo)。
五、28篇文獻(xiàn)中被引用

六、熱門產(chǎn)品
115-006-075AffiniPure F(ab')2 片段山羊抗小鼠 IgM,μ鏈特異性(最小 X 胡,Bov,Hrs Sr Prot)
115-036-072過氧化物酶偶聯(lián)的 AffiniPure F(ab')2 片段山羊抗小鼠 IgG,F(xiàn)(ab')2 片段特異性(最小 X 胡,Bov,小時(shí) Sr Prot)
109-135-098異藻藍(lán)蛋白偶聯(lián)的 AffiniPure 山羊抗人 IgG,F(xiàn)cγ 片段特異性(最小 X Bov,Hrs,Ms Sr Prot)
109-035-088過氧化物酶偶聯(lián)的 AffiniPure 山羊抗人 IgG (H+L)(最小 X Bov、Hrs、Ms Sr Prot)
115-605-071Alexa Fluor 647 偶聯(lián) AffiniPure 山羊抗小鼠 IgG,F(xiàn)cγ 片段特異性(最小 x 胡、Bov、小時(shí) Sr Prot)
115-035-209過氧化物酶偶聯(lián) AffiniPure 山羊抗小鼠 IgG,F(xiàn)cγ 亞類 3 特異性(最小 X 胡,Bov,Rb Sr Prot)
115-035-208過氧化物酶偶聯(lián)的 AffiniPure 山羊抗小鼠 IgG,F(xiàn)cγ 亞類 2c 特異性(最小 x 胡,Bov,Rb Sr Prot)
115-035-207過氧化物酶偶聯(lián) AffiniPure 山羊抗小鼠 IgG,F(xiàn)cγ 亞類 2b 特異性(最小 X 胡,Bov,Rb Sr Prot)
115-035-206過氧化物酶偶聯(lián) AffiniPure 山羊抗小鼠 IgG,F(xiàn)cγ 亞類 2a 特異性(最小 X 胡,Bov,Rb Sr Prot)
115-035-075過氧化物酶偶聯(lián) AffiniPure 山羊抗小鼠 IgM,μ鏈特異性(最小 X 胡,Bov,Hrs Sr Prot)
015-000-120普通小鼠血清
115-035-003過氧化物酶偶聯(lián)的 AffiniPure 山羊抗小鼠 IgG (H+L)
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