吳聊大鼠，大家好，我是吳文遠(yuǎn)。

本文主要研究不同失眠大鼠模型在曠場、高架十字迷宮中的行為學(xué)差異。

1材料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動物

健康8周齡清潔級SD雌雄大鼠各20只，體重(180±20)g，并在實(shí)驗(yàn)前7d開始適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境。實(shí)驗(yàn)室晝夜時(shí)間分配比1:1(晝夜各12h處理);照明時(shí)間07:30—19:30，暗時(shí)間19:30—翌日07:30;保持安靜穩(wěn)定，溫度維持在20～25℃、濕度控制在(60±5)%。

1.1.2實(shí)驗(yàn)藥物

地西泮、PCPA、吐溫80、生理鹽水，酸棗仁湯。

1.1.3實(shí)驗(yàn)儀器

5mL、10mL注射器，灌胃針頭，曠場實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)(上海欣軟XR-XZ301)，高架十字迷宮系統(tǒng)(上海欣軟XR-XG201)，SuperMaze動物行為學(xué)視頻分析系統(tǒng)。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1藥物制備

酸棗仁湯配方煎取600mL，放入4℃冰箱保存?zhèn)溆谩CPA故先用吐溫80助溶，再加入生理鹽水配制成溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。地西泮粉末經(jīng)生理鹽水溶解后配置成溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.2.2動物分組

實(shí)驗(yàn)動物按照隨機(jī)數(shù)字法分為4組，分別為酸棗仁湯組、地西泮組、模型組和空白組。每10只大鼠(雌雄各半)為一組，雌雄兩性分別置于兩個(gè)ＲVC籠子內(nèi)，大鼠的飼料和飲水采用任食任飲方式。

1.2.3造模方法

實(shí)驗(yàn)采用腹腔注射PCPA的方法構(gòu)建大鼠失眠模型，將需要配制使用的PCPA混合搖勻，模型組、地西泮組、酸棗仁湯組于每日7:30—8:30按350mg/kg以10mL/kg腹腔注射給藥，1次/d，持續(xù)3d。對照組在相同時(shí)間腹腔注射等量生理鹽水。注射完成后，大鼠造模成功的標(biāo)志為其出現(xiàn)晝夜節(jié)律消失，白晝不停活動，出現(xiàn)不安、躁動等表現(xiàn)。

1.2.4治療給藥

造模成功后，于造模結(jié)束后第2d開始每日8:00給藥，連續(xù)給藥14d，給藥的濃度、劑量根據(jù)人與大鼠體表面積換算公式計(jì)算。酸棗仁湯組按體表面積法換算成大鼠的等效劑量50g/kg，按照每只大鼠10mL/kg每日行灌胃給藥;地西泮組按體表面積法換算為1mg/kg，按照每只大鼠10mL/kg每日例行灌胃;模型組和空白組根據(jù)換算方法給予等體積生理鹽水每日例行灌胃。

1.3大鼠行為、情緒評價(jià)

1.3.1曠場實(shí)驗(yàn)

所有大鼠于造模結(jié)束后一天，先讓其適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)安靜照明環(huán)境1h后，將其放置于曠場實(shí)驗(yàn)箱正中央，實(shí)驗(yàn)箱正上方攝像頭及相關(guān)視頻跟蹤系統(tǒng)會記錄大鼠5min內(nèi)的運(yùn)動總距離、中心區(qū)停留時(shí)間以及進(jìn)入次數(shù)，追蹤系統(tǒng)與電腦相連，有相關(guān)數(shù)據(jù)采集及分析系統(tǒng)。每只大鼠于實(shí)驗(yàn)結(jié)束后取出，并清理實(shí)驗(yàn)箱一次，用75%的酒精擦拭實(shí)驗(yàn)箱防止氣味等因素干擾。

曠場實(shí)驗(yàn) XR-XZ301 上海欣軟

1.3.2高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)

所有大鼠于造模結(jié)束后一天，提前5min將其放置到實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，讓其適應(yīng)實(shí)驗(yàn)照明環(huán)境后置于高架十字迷宮的中央位置，頭朝開臂，觀察5min內(nèi)的活動情況，每只大鼠于實(shí)驗(yàn)結(jié)束后取出并用75%的酒精擦拭迷宮，以免對下一只大鼠產(chǎn)生干擾。迷宮有專門與電腦相連的系統(tǒng)來收集和分析相關(guān)數(shù)據(jù)。觀察指標(biāo):進(jìn)入開放臂次數(shù)(open arm entry，OE)、進(jìn)入開放臂時(shí)間(open arm time，TO);進(jìn)入封閉臂次數(shù)(close arm entry，CE)、進(jìn)入封閉臂時(shí)間(close arm time，TC)。并計(jì)算開臂停留時(shí)間百分比:TOC=TO/（TO+TC)×100%以及進(jìn)開臂次數(shù)百分比:NOC=OE/（OE+CE）×l00%。

高架十字迷宮 XR-XG201 上海欣軟

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

上述所有數(shù)據(jù)均經(jīng)過SPSS2 3.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，計(jì)量資料均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，P＜0.05表明具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，參數(shù)比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)、單因素方差分析

2結(jié)果

2.1大鼠行為、情緒評價(jià)結(jié)果

2.1.1曠場實(shí)驗(yàn)結(jié)果與空白組相比，PCPA誘導(dǎo)的失眠大鼠在曠場實(shí)驗(yàn)中總距離顯著降低(P＜0.05)，中央?yún)^(qū)域的進(jìn)入次數(shù)與持續(xù)時(shí)間降低不明顯(P＞0.05)，見表1。

各組的曠場實(shí)驗(yàn)軌跡圖對比見圖1，圖中結(jié)果顯示，與空白組相比，模型組大鼠在曠場實(shí)驗(yàn)中的總距離明顯減少，酸棗仁湯治療后大鼠在曠場實(shí)驗(yàn)的總距離和中央?yún)^(qū)域進(jìn)入次數(shù)較模型組增加。

2.1.2高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果

與空白組相比，PCPA誘導(dǎo)的失眠大鼠在高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)中其開臂停留時(shí)間百分比TOC和進(jìn)入開臂次數(shù)百分比NOC均有所降低，其中TOC降低比較顯著(P＜0.05)，而NOC降低不明顯(P＞0.05)，見表2。

各組的高架十字迷宮活動軌跡圖對比見圖2。圖中結(jié)果顯示，與空白組相比，模型組大鼠進(jìn)入開臂的次數(shù)明顯減少，酸棗仁湯治療后大鼠進(jìn)入高架十字迷宮開臂的次數(shù)較模型組增加。

3討論

本實(shí)驗(yàn)采用了PCPA失眠模型，并采用了曠場實(shí)驗(yàn)、高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)進(jìn)行模型的行為學(xué)評估。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，造模后的大鼠相比于空白組，其曠場實(shí)驗(yàn)運(yùn)動總距離明顯降低，中央?yún)^(qū)域的進(jìn)入次數(shù)與持續(xù)時(shí)間降低，但是降低不明顯;而高架十字迷宮的結(jié)果則顯示其TOC和NOC均下降，其中TOC下降比較顯著。曠場實(shí)驗(yàn)中大鼠對中央?yún)^(qū)域的探索情況一定程度上表現(xiàn)了大鼠的焦慮水平，高架十字迷宮中大鼠對開臂的探索在一定程度上表現(xiàn)了大鼠好奇度及對未知外界環(huán)境的興趣，本實(shí)驗(yàn)得出的結(jié)果說明造模后的大鼠相比于空白組的大鼠來說，其對中央?yún)^(qū)域的探索度降低，在曠場中運(yùn)動度明顯減少，有一定的焦慮癥狀出現(xiàn)，導(dǎo)致其對環(huán)境的興趣和探索降低，這與臨床中多數(shù)失眠患者出現(xiàn)焦慮，對事物好奇心、探索度降低有相似之處。