一、樣品處理
1.1 Q：包埋過(guò)程應(yīng)遵從什么原則？
A：
(1) 選取的組織要大小合適，便于后續(xù)實(shí)驗(yàn)操作。
(2) 取的組織要盡量新鮮，避免RNA降解。
(3) 選用合適的包埋盒，包埋盒不能過(guò)小，避免在包埋過(guò)程中，包埋劑膨脹會(huì)擠壓組織。
(4) 包埋過(guò)程中避免包埋劑分層，防止組織表面形成小冰塊，避免氣泡的形成，影響后續(xù)切片實(shí)驗(yàn)。
1.2 Q：切片染色拍照后發(fā)現(xiàn)組織中間有空洞，是怎么回事？
A：包埋過(guò)程中如有擠壓情況發(fā)生，可能會(huì)導(dǎo)致組織出現(xiàn)形態(tài)變化，發(fā)生空洞現(xiàn)象，建議包埋過(guò)程中注意組織的夾取情況，減少對(duì)組織的擠壓。
1.3 Q：組織形態(tài)皺縮是怎么回事？
A：針對(duì)這種情況冷凍溫度和時(shí)間的控制則極為重要，冷凍溫度不要過(guò)低，一般以- 18℃為宜。冷凍時(shí)間要嚴(yán)格控制不要過(guò)長(zhǎng)，隨時(shí)觀察凍上即可。這樣可以有效地避免組織過(guò)度收縮。
1.4 Q：組織形態(tài)變型嚴(yán)重是怎么回事？
A：有可能是使用的包埋盒體積過(guò)小，在包埋的過(guò)程中，包埋劑膨脹，對(duì)組織進(jìn)行了擠壓，導(dǎo)致組織變形嚴(yán)重，建議更換大一些的包埋盒進(jìn)行重新包埋。
1.5 Q：樣品中冰晶過(guò)多如何避免？
A：取材后的組織宜先用干紗布在組織表面輕輕按壓，盡量將組織表面的水分吸干；包埋時(shí)在冷凍托上滴加包埋劑的厚度較一般組織適當(dāng)增加（0. 6 cm 厚度為宜），這樣可以使組織離冷凍托不至太近，從而避免冷凍過(guò)度；部分文章中還認(rèn)為應(yīng)置入-80℃冰箱速凍使其跨過(guò)冰晶形成溫度。
二、冷凍切片
2.1 Q：冰凍切片發(fā)生卷縮怎么辦？如何補(bǔ)救？
A：
(1) 使用防卷板，使冰凍切片進(jìn)入防卷板后進(jìn)行展片，可在一定程度上防止冰凍切片的卷縮。
(2) 考慮是否室內(nèi)溫度與切片機(jī)箱體溫度溫差過(guò)大，如環(huán)境溫度過(guò)高，有可能會(huì)導(dǎo)致冰凍切片發(fā)生卷曲。
(3) 防卷板是否干凈，保持防卷板干凈、平整、無(wú)缺損、無(wú)刮傷，其邊緣應(yīng)于切片刀邊緣平行。
(4) 是否切片時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，導(dǎo)致冷凍室溫度降低，應(yīng)注意時(shí)間間隔，，蓋上冷凍室蓋，降低防卷板溫度。
補(bǔ)救：可用毛筆的筆尖輕輕的掃過(guò)切片補(bǔ)救，使其展開(kāi)，注意不要碰到組織。
2.2 Q：載玻片粘不上切片怎么回事？
A：此情況多見(jiàn)于載玻片溫度過(guò)低，只要使載玻片與切片間有一定溫度差，切片即可貼到載玻片上，一般將載玻片置于常溫即可。
2.3 Q：冰凍切片破碎不全是什么情況導(dǎo)致的？
A：
(1) 組織塊復(fù)溫時(shí)間不夠，組織塊過(guò)冷，過(guò)硬，切片易發(fā)生破碎。
(2) 箱體溫度設(shè)置不當(dāng)。溫度設(shè)置過(guò)低，組織塊過(guò)冷，切片易破碎；箱體溫度設(shè)置過(guò)高，組織塊冷凍不夠，硬度和韌度達(dá)不到成片的要求，切片會(huì)易粘易碎。
(3) 組織塊可能過(guò)大或包埋過(guò)程中產(chǎn)生過(guò)多冰晶。
(4) 切片刀使用時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，使其較臟或較鈍，切片出現(xiàn)劃痕，使切片不完整。
(5) 操作手法不當(dāng)。
2.4 Q：箱壁和切片機(jī)上結(jié)霜
A：
(1) 冷凍切片機(jī)遇到氣流(開(kāi)窗、開(kāi)門、開(kāi)空調(diào)) ?？梢浦翢o(wú)通風(fēng)處；
(2) 呼吸氣流進(jìn)入冷凍箱導(dǎo)致。
2.5 Q：切片軟化
A：防卷板冷凍不足,使切片升溫
2.6 Q：切片不平整
A：
(1) 防卷板位置不正確。重新放置防卷板。
(2) 防卷板未與刀刃對(duì)齊。正確對(duì)齊。
(3) 間隙角不正確。正確設(shè)置角度
(4) 刀和/或防卷板不干凈。
(5) 防卷板邊緣損壞。
(6) 切片刀變鈍。
2.7 Q：防卷板上的切片打卷
A：防卷板超出刀刃不夠
2.8 Q：切片和樣本回位時(shí)有摩擦聲
A：防卷板超出刀刃過(guò)多，刮到樣品
2.9 Q：切片時(shí)發(fā)出咯咯聲
A：
(1) 樣品托未夾緊。
(2) 切片刀未夾緊。
(3) 切片刀變鈍。
(4) 刀片型號(hào)與待切樣品不吻合。所選間隙角不合適。
2.10 Q：清潔時(shí)在防卷板和刀片上產(chǎn)生冷凝水
A：刷子、鑷子以及布的溫度過(guò)高
2.11 Q：防卷板調(diào)整后損壞
A：防卷板高出刀刃過(guò)多，按切片方向進(jìn)行調(diào)整。
2.12 Q：切片厚薄不均
A：(1) 使用組織溫度不精確。
(2) 刀片型號(hào)與待切樣本不吻合。
(3) 刀背結(jié)冰。
(4) 手輪轉(zhuǎn)速不勻或速度設(shè)置不精確。
(5) 切片刀未夾緊。
(6) 樣品托未完全夾緊。
(7) 切片刀變鈍、切片厚度不合適、間隙角不正確。
(8) 樣品干縮。
2.13 Q：組織粘在防卷板上
A：(1) 防卷板位置過(guò)高或位置不當(dāng)。
(2) 防卷板邊角有油脂。
(3) 防卷板未正確固定。
(4) 切片刀生銹。
2.14 Q：組織皺縮在防卷板出，或切片切著切著就歪向一邊皺縮，為何？如何處理？
A：包埋塊左右兩邊的切口不平，不整齊。切片進(jìn)入防卷板受力不均勻，剮蹭皺縮?？蓪駢K左右兩側(cè)削平削整齊。切片時(shí)，包埋塊切面為正圓形最易切片。
