TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling) ：基因組DNA斷裂時(shí)，暴露的3’-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上熒光素 (FITC) 標(biāo)記的dUTP (fluorescein-dUTP) ，從而可以通過熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測。
科研汪常用的實(shí)驗(yàn)材料是冰凍組織切片，故以此為例。
a. 用4%多聚甲醛固定細(xì)胞30-60分鐘。
b. PBS或HBSS洗滌2次，每次10分鐘。
c. 加入含0.1% Triton X-100的PBS，冰浴孵育2分鐘。
d.按片子數(shù)量和組織大小取tunel試劑盒內(nèi)適量試劑1 (TdT) 和試劑2(dUTP)按2:29混合（現(xiàn)配現(xiàn)用），覆蓋組織，切片平放于濕盒內(nèi)，37℃恒溫孵育2小時(shí)，濕盒內(nèi)加少量水保持濕度。
e.BSA封閉:將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min，3%BSA均勻覆蓋組織，室溫封閉30min。
f.加一抗：輕輕甩掉封閉液，在切片上滴加PBS按說明書比例配好的一抗，切片平放于濕盒內(nèi)4°C孵育過夜。
g.加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后滴加與一抗相應(yīng)種屬的二抗覆蓋組織，避光室溫孵育50min。
h.DAPI復(fù)染細(xì)胞核：切片用PBS（PH7.4）洗滌3次，每次5min。去除PBS后滴加DAPI染液，避光室溫孵育10min。
i.封片：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。
j.拍照：切片于倒置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。（紫外激發(fā)波長330-380nm，發(fā)射波長420nm；FITC綠光激發(fā)波長465-495nm，發(fā)射波長515-555nm；CY3紅光激發(fā)波長510-560，發(fā)射波長590nm）。
參考鏈接：
1.TUNEL：
https://baike.baidu.com/item/TUNEL%E6%A3%80%E6%B5%8B/5559937?fr=aladdin
2.組織Tunel：
