細(xì)胞培養(yǎng)知識點(diǎn)

DAPI

即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole),是一種能夠與DNA強(qiáng)力結(jié)合的熒光染料,常用于熒光顯微鏡觀測.
因?yàn)镈API可以透過完整的細(xì)胞膜,它可以用于活細(xì)胞和固定細(xì)胞的染色。(流式檢測熒光病毒感染細(xì)胞時加DAPI去死活)

三抗

有些抗生素會在一周內(nèi)降解,培養(yǎng)基最好現(xiàn)用現(xiàn)配。

丙酮酸鈉

丙酮酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源,盡管細(xì)胞更傾向于以葡萄糖作為碳源,但是如果沒有葡萄糖的話,細(xì)胞也可以代謝丙酮酸鈉。

谷氨酰胺

幾乎所有的細(xì)胞對谷氨酰胺都有較高的要求。谷氨酰胺脫掉氨基后,可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來源,參與蛋白質(zhì)的合成和能量代謝。在缺少谷氨酰胺時,細(xì)胞生長不良而死亡。所以,各種培養(yǎng)液中都含有較大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定,應(yīng)置-20℃冰凍保存,用前加入培養(yǎng)基中。加有谷氨酰胺的液體培養(yǎng)基4度冰箱儲存兩周以上時,應(yīng)重新加入原來量的谷氨酰胺。

GlutaMAX-Ⅰ

GlutaMAX-Ⅰ是一個L-谷氨酰胺的衍生物,其不穩(wěn)定的a-氨基用L-丙氨酸來保護(hù)。一種肽酶逐漸裂解二肽,釋放L-谷氨酰胺供利用。

GlutaMAX-Ⅰ二肽非常穩(wěn)定,即使在121℃滅菌20min, GlutaMAX-Ⅰ二肽溶液有最小的降解;而在相同條件下,L-谷氨酰胺幾乎完全降解。

L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)時是重要的,但其在溶液中不穩(wěn)定,經(jīng)過一段時間后會降解,確切的降解率一直沒有最終確定。L-谷氨酰胺的降解導(dǎo)致氨的形成,而氨對于一些細(xì)胞具有毒性。因此GlutaMAX-Ⅰ是細(xì)胞培養(yǎng)中谷氨酰胺的替代品

NaHCO3的作用

與CO2一起形成緩沖系統(tǒng),保持培養(yǎng)基PH值穩(wěn)定。

NRDC基因

在細(xì)胞表面,NRDc能夠結(jié)合HB-EGF并能促進(jìn)其誘導(dǎo)的細(xì)胞遷移。 NRDc基因敲除的小鼠,大部分在出生后48小時內(nèi)死亡,神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育滯后。 我們研究發(fā)現(xiàn),NRDc是第一個特異結(jié)合組蛋白H3K4me2的蛋白,并且具有調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄的功能。

Dispase II-分散酶II

中文名分散酶II,一種非特異性金屬蛋白酶,細(xì)胞生物學(xué)中常被用來從各種不同組織或器官中消化細(xì)胞外基質(zhì),釋放并制備原代單細(xì)胞;或用于細(xì)胞培養(yǎng)中的細(xì)胞收獲或接種轉(zhuǎn)移;也被用于防止懸浮細(xì)胞培養(yǎng)時的細(xì)胞意外結(jié)團(tuán)。,如原代細(xì)胞的分離,細(xì)胞傳代等。另外,Dispase II還可用于消除懸浮細(xì)胞培養(yǎng)過程中發(fā)生的細(xì)胞聚集。與其他細(xì)胞生物學(xué)常用蛋白酶(如胰蛋白酶、膠原酶、鏈霉蛋白酶等)相比,該酶具有以下優(yōu)勢:1)一種快速有效且溫和的細(xì)胞消化酶,對細(xì)胞損傷小,且能維持細(xì)胞膜完整性;2)來源于細(xì)菌,無支原體或其他動物病毒污染;3)穩(wěn)定性強(qiáng),不受溫度、pH及血清組分的影響;4)可用于多種類型組織和細(xì)胞的分離等。
本品非無菌Dispase II,來源于Bacillus polymyxa,使用時需對其除菌處理,用于細(xì)胞培養(yǎng)時常用工作濃度為0.6-2.4 U/mL。

Accutase?-細(xì)胞消化液

是包含蛋白水解酶和膠原酶活性的一種細(xì)胞消化液,是胰酶/EDTA消化液的完美替換產(chǎn)品,用于從常規(guī)組織培養(yǎng)器皿和粘附培養(yǎng)器皿中消化細(xì)胞,消化為單個細(xì)胞。與傳統(tǒng)的胰酶消化液相比,本品具有以下優(yōu)勢:
1)適用于絕大多數(shù)原代細(xì)胞和哺乳動物細(xì)胞系的消化,以及昆蟲細(xì)胞;
2)溫和有效的消化干細(xì)胞(hESCs和mESCs),凍存后細(xì)胞具更高復(fù)蘇率;
3)幾分鐘內(nèi)實(shí)現(xiàn)粘附細(xì)胞的分離,不需清洗或中和反應(yīng),節(jié)省細(xì)胞傳代時間;
4)對細(xì)胞消化較為溫和,能增加細(xì)胞產(chǎn)量和存活率;增強(qiáng)細(xì)胞貼壁效率;改善細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞生長特性等。
注意事項:Accutase?融化后4℃保存,至少2個月穩(wěn)定。不可室溫保存。也可分裝成單次用量,放到-80 ℃凍存,有效期2年。

mTeSR?1

cGMP mTeSR?1是使用最為廣泛的,用于培養(yǎng)人胚胎干細(xì)胞(ES 細(xì)胞)和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(hiPS 細(xì)胞)的無飼養(yǎng)層培養(yǎng)基。從iPS的生成、培養(yǎng)到誘導(dǎo)分化,使用mTeSR?1培養(yǎng)細(xì)胞均建立了成熟的實(shí)驗(yàn)流程;該培養(yǎng)基已在50多個國家成功用于維持上千種ES細(xì)胞系和iPS細(xì)胞系,應(yīng)用此培養(yǎng)基的研究成果發(fā)表于頂級的多能干細(xì)胞雜志,并為干細(xì)胞研究人員提供了強(qiáng)大的支持。
mTeSR?1是一款高度專業(yè)化、不含血清的完全培養(yǎng)基。mTeSR?1培養(yǎng)基選用的原材料經(jīng)過嚴(yán)格的預(yù)篩選,確保了批次間的一致性,同時為ES 和iPS細(xì)胞的無飼養(yǎng)層培養(yǎng)提供穩(wěn)健的實(shí)驗(yàn)環(huán)境,這為研究人員提供具有高度一致性的、表型均一、未經(jīng)分化的高質(zhì)量ES/iPS細(xì)胞培養(yǎng)物提供了保障。
mTeSR1在符合cGMP質(zhì)量管理體系下生產(chǎn),確保最高的質(zhì)量和一致性以及可重復(fù)性。

AGM-S3細(xì)胞

建立體外AGM-S3基質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)體系,以揭示AGM-S3細(xì)胞對終末分化中性.

菌落形成單位(cfu,colony forming units)

是指在瓊脂平板上經(jīng)過一定溫度和時間培養(yǎng)后形成的每一個菌落,是計算細(xì)菌或霉菌數(shù)量的單位。這個單位比“菌落數(shù)”更準(zhǔn)確地反映問題的實(shí)質(zhì)。理論上,一個活細(xì)菌可以在條件合適的固體表面上形成一個菌落,但是吸附于微小顆粒上的兩個以上菌體或粘連在一起的菌團(tuán)可能共同形成一個菌落,而且不同環(huán)境因素作用下,細(xì)菌的生活能力各不相同,會影響其在該條件下形成菌落的能力,致使形成的菌落數(shù)遠(yuǎn)低于實(shí)際的活菌數(shù)。因此可用菌落形成單位代替以往常用的“菌落數(shù)”作為平板計數(shù)的數(shù)量單位。

ReLeSR?

消化試劑。一種無酶試劑,適用于將人胚胎干(ES)細(xì)胞或人誘導(dǎo)多能干(iPS)細(xì)胞集落解離為細(xì)胞聚集體,且無需對已發(fā)生分化的集落進(jìn)行手工挑選。

Matrigel Basement Membrane Matrix

Matrigel是一種細(xì)胞外基質(zhì)的混合物,其中包含laminin和多種生長因子,用于細(xì)胞培養(yǎng)。

基底膠是從富含胞外基質(zhì)蛋白的EHS小鼠腫瘤中提取出基底膜基質(zhì),其主要成分有層粘連蛋白、Ⅳ型膠原、巢蛋白、肝素糖蛋白,還包含生長因子和基質(zhì)金屬蛋白酶等。在室溫條件下,基底膠聚合形成具有生物學(xué)活性的三維基質(zhì),模擬體內(nèi)細(xì)胞基底膜的結(jié)構(gòu)、組成、物理特性和功能,有利于體外細(xì)胞的培養(yǎng)和分化,可用于對細(xì)胞形態(tài)、生化功能、遷移、侵染和基因表達(dá)等的研究。
用途:培養(yǎng)細(xì)胞時可無需稀釋直接包被,包被厚度可為0.5 mm(薄層)或1.0 mm(厚層)。Matrigel也可以在無血清培養(yǎng)基中稀釋后用于包被培養(yǎng)器皿表面,根據(jù)細(xì)胞類型和應(yīng)用目的確定相應(yīng)Matrigel濃度。

Gentle Cell Dissociation Reagent (GCDR)

溫和細(xì)胞解離試劑(GCDR)是一種無酶試劑,適用于將人胚胎干(ES)細(xì)胞或人誘導(dǎo)多能干(iPS)細(xì)胞解離為細(xì)胞聚集體以進(jìn)行常規(guī)傳代或單細(xì)胞懸浮液。它也適用于分離腸隱窩以建立腸道類器官,以及用于在傳代類器官培養(yǎng)物時分解康寧?基質(zhì)凝膠?圓頂。GCDR不含酶或其他蛋白質(zhì)。

GCDR現(xiàn)在也在經(jīng)過認(rèn)證的質(zhì)量管理體系下按照相關(guān)的cGMP制造,以確??芍貜?fù)結(jié)果的最高質(zhì)量和一致性。

Essential 8? 培養(yǎng)基(E8)

基于最原始的配方,是我們成分明確、一致性高的無滋養(yǎng)層培養(yǎng)基,用于培養(yǎng)誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(iPSC)。也可用于ESC培養(yǎng)。(* DOI: 10.1111/cpr.13002

STEMdiff? APEL?

人多能干細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基,是完全確定的、不含血清和動物源成份的培養(yǎng)基,用于人ES和iPS細(xì)胞的分化。它是基于AndrewElefanty博士發(fā)表的APEL配方(缺乏不確定的成份,如不含蛋白的雜交瘤培養(yǎng)基)
該培養(yǎng)基可用于貼壁或EB操作流程。 可與多種不同的誘導(dǎo)因子或細(xì)胞因子一起使用,支持外胚層,中胚層和內(nèi)胚層譜系的分化。

培養(yǎng)基里的“四大金剛”—MEM、DMEM、1640、F-12

它們基本參與了90%以上種類細(xì)胞的培養(yǎng)過程。

MEM

作為帶頭大哥,能力非常全面,號稱是應(yīng)用最廣泛的細(xì)胞培養(yǎng)液。

DMEM

作為隨時緊跟老大MEM的二弟,青出于藍(lán)而勝于藍(lán),濃度要高出2~4倍,可分為高糖型(含葡萄糖4500mg/L)和低糖型(含葡萄糖1000mg/L)。

1640

老三中規(guī)中矩,營養(yǎng)成分比較簡單,比DMEM少一點(diǎn)糖和谷光甘肽,常用于淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)。

F12培養(yǎng)基

起初是作為一種無血清配方設(shè)計的,常補(bǔ)加血清用于支持各種正常的和轉(zhuǎn)化細(xì)胞的增殖。F12常和DMEM以I:I結(jié)合,稱為DMEM/F12培養(yǎng)基,作為開發(fā)無血清配方的基礎(chǔ),以利用F12含有較豐富的成分和DMEM含有較高濃度的營養(yǎng)成分的優(yōu)點(diǎn)。
小兄弟F12常用來支持CHO、Hela和L-細(xì)胞生長以及原代大鼠肝細(xì)胞和前列腺上皮細(xì)胞的培養(yǎng)。MEM和F12 這兩種培養(yǎng)基各取1/2,即可形成神經(jīng)生物學(xué)最通用的培養(yǎng)基。

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