一、血液樣本RNA提取準(zhǔn)備

外周血一直被認(rèn)為是容易獲取，侵害性較小的測(cè)序樣本。且血液樣本處理及保存方法簡(jiǎn)便、成本低且富含可利用成分（如血清、血漿、白細(xì)胞和紅細(xì)胞等）和生物分子（DNA、RNA、蛋白質(zhì)和代謝產(chǎn)物）。在許多生物樣本庫(kù)中，是進(jìn)行多個(gè)項(xiàng)目分析的理想實(shí)驗(yàn)材料。然而，RNA極易降解，許多因素如內(nèi)源性和外源性的核糖核酸酶（RNase）。必須注意樣本收集、穩(wěn)定、保存和運(yùn)輸、分離純化操作過程的各個(gè)環(huán)節(jié)，從根本上確保獲得高質(zhì)量的血液RNA

血液RNA收集、穩(wěn)定、保存和運(yùn)輸、分離純化流程步驟

目前血液RNA提取樣本制備常見的方法有2種，PAXgene RNA tube法?和TRIzol法，接下來會(huì)為大家一一詳細(xì)介紹。

1、PAXgene RNA tube法血液樣本準(zhǔn)備

PAXgene采血管（PAXgene blood RNA tube）經(jīng)常被用于PAXgene法中收集和穩(wěn)定血液RNA，內(nèi)含能夠穩(wěn)定體內(nèi)基因轉(zhuǎn)錄性狀的抗凝劑。目前已有研究表明PAXgene采血管保存全血可以保護(hù)RNA免于降解，具有長(zhǎng)期穩(wěn)定性。

采血后應(yīng)立即將PAXgene采血管輕輕地顛倒8-10次，可確保管內(nèi)保護(hù)劑和血液充分混合均勻。

PAXgene采血管真身就是這個(gè)樣子滴

（我們平時(shí)去醫(yī)院抽血應(yīng)該都見到過）

2、TRIzol法血液RNA樣本準(zhǔn)備

推薦使用Paxgen Blood RNA tube（全血RNA管）。采血管中添加了保護(hù)試劑，使細(xì)胞內(nèi)的RNA不被降解。在18~25℃可以保存3天，2~8℃可以保存5天，在-20℃或-70℃條件下至少穩(wěn)定50個(gè)月，總量≥ 2.5ml，-80°C保存，干冰運(yùn)輸。

3、血清樣本RNA提取準(zhǔn)備

分離血清血漿應(yīng)嚴(yán)格按照操作說明進(jìn)行，操作需在1h內(nèi)完成，避免出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，血清血漿分離后避免反復(fù)凍融。（推薦抗凝劑：EDTA、檸檬酸鈉。）

二、組織樣本RNA提取準(zhǔn)備

1、有液氮的條件下

組織樣品在離體后，快速用Rnase-free配制的生理鹽水或PBS清洗樣本表面污漬，吸干表面液體后迅速將樣本分割成約100mg（綠豆大?。?/b>，約10小塊左右，將樣本放入已標(biāo)記好名稱且預(yù)冷好的Rnase-free的螺紋管中（不要將蓋子擰死，以免從液氮中取出時(shí)破裂），組織離體后應(yīng)在5min內(nèi)用液氮浸沒，讓其迅速降溫，徹底冷凍后轉(zhuǎn)移至-80℃，避免反復(fù)凍融，確保迅速投入液氮中速凍>=1h，然后取出置于-80℃保存，干冰運(yùn)輸。

2、無液氮的條件下

提前準(zhǔn)備好RNase-free的1.5mL的EP管，向其中加入1mL的RNAlater。組織樣品離體后，快速用RNase-free生理鹽水/PBS清洗樣本表面的污漬，并吸干表面的液體，迅速的將樣本分割后投入提前準(zhǔn)備好的1.5mL的EP管中，使樣本完全浸沒在液體中，采樣的容器應(yīng)該足夠大，避免組織塊擠在一起，為避免組織塊在運(yùn)輸?shù)倪^程中露出液面，應(yīng)將RNAlater灌滿容器，將樣本置于 4°C保存過夜（以使RNAlater完全滲透組織），然后轉(zhuǎn)移至-80°C長(zhǎng)期保存。

三、體液、糞便樣本RNA提取準(zhǔn)備

收集 5- 10ml 新鮮尿液、膽汁、糞便或者腹腔引流液；

置于 4°C 或冰盒中正立放置之后轉(zhuǎn)移至 15- 50ml 錐形底的離心管中；

4°C ，1000 rpm ，離心10 min（去除細(xì)胞及碎片）；

小心轉(zhuǎn)移上清到新的?15- 50ml 錐形底的離心管中（注意不要轉(zhuǎn)移沉淀）；

4°C ，2500 rpm ，離心10 min（ 去除殘留的碎片及細(xì)菌細(xì)胞）；

轉(zhuǎn)移上清至新的 2mlEP 管中，嚴(yán)格封口，- 80°C長(zhǎng)期保存。