隨著基因工程和細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展，將siRNA導(dǎo)入真核細(xì)胞的轉(zhuǎn)染技術(shù)，已成為研究基因功能、調(diào)控基因表達(dá)和突變分析等生物學(xué)試驗(yàn)的一種重要手段。目前，能夠?qū)iRNA導(dǎo)入細(xì)胞的方法主要有物理介導(dǎo)（電穿孔法、顯微注射和基因槍）、化學(xué)介導(dǎo)（磷酸鈣共沉淀法、載體轉(zhuǎn)染等）以及生物介導(dǎo)（原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染、病毒轉(zhuǎn)染）三種途徑。但由于物理介導(dǎo)法對細(xì)胞的傷害很大且需要借助特殊設(shè)備，而生物介導(dǎo)法的準(zhǔn)備程序又比較復(fù)雜，并且常常對細(xì)胞類型有很強(qiáng)的選擇性，因此，化學(xué)介導(dǎo)法成為實(shí)驗(yàn)室最常用的方法，其中又以載體轉(zhuǎn)染法最為普遍。

市面上大多數(shù)的轉(zhuǎn)染載體都是脂質(zhì)體類載體，這類載體對細(xì)胞的毒性比較大，轉(zhuǎn)染效果有時(shí)也不夠理想。但隨著納米生物材料的發(fā)展，利用該種材料研發(fā)的轉(zhuǎn)染載體不僅擁有極低的細(xì)胞毒性，在轉(zhuǎn)染效率上也有非常不錯(cuò)的表現(xiàn)，以下是幾種目前實(shí)驗(yàn)室最常用的siRNA轉(zhuǎn)染試劑。

一、Lipofectamine 3000

Lipofectamine 3000是一款市場占有率和知名度都很高的轉(zhuǎn)染試劑。該款產(chǎn)品采用了脂肪納米微粒技術(shù)，它屬于一種脂質(zhì)體類的轉(zhuǎn)染試劑。大家都知道Lipofectamine 2000原先是十分受歡迎的，但由于細(xì)胞毒性較為明顯，其推廣應(yīng)用受到較大影響。Lipofectamine 3000較Lipofectamine 2000在成分上做了優(yōu)化，細(xì)胞毒性和Lipofectamine 2000相比，要小了很多。盡管如此，Lipofectamine 3000對部分細(xì)胞還是存在較為明顯的細(xì)胞毒性的。雖然其說明書表述該試劑對細(xì)胞作用溫和、轉(zhuǎn)染后非必需換液，但大多數(shù)科研者在分享轉(zhuǎn)染經(jīng)驗(yàn)時(shí)還是建議轉(zhuǎn)染后6-8小時(shí)更換培養(yǎng)液，如果不及時(shí)更換新鮮的培養(yǎng)基，細(xì)胞死亡率還是比較高的，可達(dá)20-30%左右。不過，對于一些耐受性強(qiáng)的細(xì)胞，Lipofectamine 3000還是有比較不錯(cuò)的轉(zhuǎn)染效率的。因而，研究者在選擇使用Lipofectamine 3000時(shí)，需要考慮所要轉(zhuǎn)染的細(xì)胞對脂質(zhì)體的毒性是否耐受。

此外，使用Lipofectamine 3000進(jìn)行轉(zhuǎn)染復(fù)合物配制時(shí)，需要使用特殊培養(yǎng)基--Opti-MEM減血清培養(yǎng)基，來分別稀釋轉(zhuǎn)染試劑與小核酸進(jìn)行配制。實(shí)驗(yàn)者需要額外購買這種減血清培養(yǎng)基。

二、Lipofectamine RNAi MAX

Lipofectamine RNAi MAX，是目前國際公認(rèn)的最為權(quán)威的siRNA轉(zhuǎn)染試劑之一。在賽默飛現(xiàn)售的所有轉(zhuǎn)染試劑中，RNAi MAX的轉(zhuǎn)染密度要求是最低的，細(xì)胞融合度在30-50%時(shí)就可以進(jìn)行轉(zhuǎn)染，而像Lipofectamine 2000/3000都要求融合度在70-90%之間轉(zhuǎn)染。其實(shí)，要想知道一個(gè)轉(zhuǎn)染試劑的毒性通過它的轉(zhuǎn)染密度要求就能看出來，這也從側(cè)面反應(yīng)出，RNAi MAX的細(xì)胞毒性是更低的。

并且，相較Lipofectamine 3000，RNAi MAX做到了低siRNA濃度下就可獲得優(yōu)良的轉(zhuǎn)染效果，轉(zhuǎn)染性能又上了一個(gè)臺(tái)階。但是，實(shí)驗(yàn)者使用RNAi MAX轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行siRNA轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染后一般無需換液，但配制轉(zhuǎn)染復(fù)合物時(shí)依舊需要額外購買Opti-MEM培養(yǎng)基。

作為這樣一款高性能的siRNA轉(zhuǎn)染試劑，RNAi MAX的售價(jià)自然不菲，其一支1.5mL規(guī)格的轉(zhuǎn)染試劑，定價(jià)已逾萬，這點(diǎn)對于很多經(jīng)費(fèi)有限的實(shí)驗(yàn)者來說往往需要考慮再三。

三、RFect V2 siRNA轉(zhuǎn)染試劑

RFect V2 siRNA轉(zhuǎn)染試劑是在RFect siRNA轉(zhuǎn)染試劑基礎(chǔ)上的升級產(chǎn)品，目前受到很多實(shí)驗(yàn)室的肯定。該試劑以新型可降解納米材料為主要成分研發(fā)而成，區(qū)別于市場上的脂質(zhì)體類轉(zhuǎn)染試劑如Lipofectamine 3000、RNAi MAX。

升級后的RFect V2 siRNA轉(zhuǎn)染試劑在各方面都有顯著的提升。細(xì)胞毒性上，使用RFect V2 siRNA轉(zhuǎn)染試劑在細(xì)胞融合度30-50%之間進(jìn)行轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染后細(xì)胞死亡率只有5%左右，比RFect要更低，似乎還略優(yōu)于RNAi MAX。轉(zhuǎn)染效率上，Rfect V2 siRNA轉(zhuǎn)染試劑盒里配置有專研的siRNA轉(zhuǎn)染增強(qiáng)劑，能夠有效降低細(xì)胞膜的免疫排異反應(yīng)，從而提升siRNA轉(zhuǎn)染的效率。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，Rfect V2在很多貼壁細(xì)胞中的mRNA敲除效率可高達(dá)95%左右，比Rfect小核酸轉(zhuǎn)染試劑要高出5-30%。我們將RFect V2和RNAi MAX分別轉(zhuǎn)染小核酸NC-FAM到Hela細(xì)胞中，比較兩個(gè)試劑的轉(zhuǎn)染效率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩者的轉(zhuǎn)染效率皆達(dá)到了90%以上，難分伯仲。

另外，使用RFect V2 siRNA轉(zhuǎn)染試劑不需要搭配如Opti-MEM這類特殊的培養(yǎng)基，其siRNA轉(zhuǎn)染增強(qiáng)劑可完全替代無血清培養(yǎng)基配制轉(zhuǎn)染復(fù)合物，轉(zhuǎn)染效果更好。同時(shí)，血清對Rfect V2的轉(zhuǎn)染效果也沒有影響，也不必在轉(zhuǎn)染4-6小時(shí)后換液，這些方面增加了實(shí)驗(yàn)的方便性，更有利于研究者使用。