絕大多數(shù)情況下，CDH5-ert2 Cre 小鼠的純合子（Homozygote）是可以正常使用的，并且是許多實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)做法。
但為了確保您實(shí)驗(yàn)的嚴(yán)謹(jǐn)性和成功率，以下是詳細(xì)的解釋和需要注意的關(guān)鍵點(diǎn)：
為什么純合子通?？捎?？
1. 基因功能冗余性：CDH5（Cadherin 5，又稱 VE-Cadherin）基因本身是編碼血管內(nèi)皮鈣黏蛋白的。在 Cre 工具鼠中，我們利用的是它的啟動(dòng)子（Promoter）?來驅(qū)動(dòng) Cre-ERT2 的表達(dá)，而不是為了敲除或過表達(dá) Cdh5 基因本身。因此，即使有兩個(gè)等位基因都插入了 Cre-ERT2（即純合子），也不會(huì)造成 Cdh5 基因功能的完全缺失，小鼠的內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)育通常是正常的。
2. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/b>：使用這種工具鼠的核心目的是在內(nèi)皮細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)他莫昔芬（Tamoxifen）誘導(dǎo)的、特異性的基因重組。只要 Cre 重組酶的活性足夠、特異性好，純合子小鼠就能很好地完成這個(gè)任務(wù)。
3. 普遍做法：在許多已發(fā)表的頂級(jí)期刊論文中，研究者通常會(huì)將?*Cdh5-ert2 Cre*?小鼠與?*Rosa26-LSL-tdTomato*?或其他報(bào)告基因小鼠交配，并繁育出?Cre 純合、報(bào)告基因也純合?的后代用于實(shí)驗(yàn)。這樣做的好處是：
簡化基因型鑒定：所有后代都100%攜帶所需的等位基因，無需篩選。
保證重組效率：純合子的 Cre 表達(dá)量可能更高，有助于實(shí)現(xiàn)更高效、更徹底的基因重組。
使用純合子時(shí)必須注意和驗(yàn)證的事項(xiàng)：
盡管通?？捎茫?b>絕對(duì)不能想當(dāng)然。在將純合子大規(guī)模用于正式實(shí)驗(yàn)前，必須進(jìn)行以下驗(yàn)證：
1. 品系背景（Genetic Background）：這是最重要的變量。不同品系（C57BL/6, FVB等）的遺傳背景可能會(huì)影響 Cre 的表達(dá)活性和特異性。您需要查閱您所擁有的特定品系小鼠的原始文獻(xiàn)或供應(yīng)商（如Jackson Lab）提供的說明。有些品系的純合子可能表現(xiàn)出輕微的表型，但通常不影響使用。
2. 驗(yàn)證 Cre 活性和特異性：這是必須進(jìn)行的關(guān)鍵對(duì)照實(shí)驗(yàn)。
3. 與報(bào)告基因鼠交配：將您的?*Cdh5-ert2 Cre*?純合子小鼠與?*Rosa26-LSL-tdTomato*?或?*Rosa26-LSL-LacZ*?等報(bào)告基因小鼠交配。
4. 誘導(dǎo)并檢測：對(duì)成年后代注射他莫昔芬，幾天后取出組織（如心臟、肝臟、肺、腦等）進(jìn)行冰凍切片和熒光成像/染色。
評(píng)估：
1. 效率（Efficiency）：是否絕大多數(shù)內(nèi)皮細(xì)胞都表達(dá)了報(bào)告基因（如tdTomato紅色熒光）？純合子的效率通常很高。
2. 特異性（Specificity）：報(bào)告基因的表達(dá)是否僅限于內(nèi)皮細(xì)胞？有沒有在其他非目標(biāo)細(xì)胞類型（如血細(xì)胞、心肌細(xì)胞等）中泄露（Leakiness）？他莫昔芬誘導(dǎo)的Cre系統(tǒng)本身泄露性很低，但仍需驗(yàn)證。
3. 本底活性（Basal Activity）：在不注射他莫昔芬的對(duì)照組中，是否完全沒有重組發(fā)生？
4. 觀察小鼠健康狀況：雖然罕見，但仍需觀察純合子小鼠是否有任何明顯的發(fā)育異常、生育能力下降或健康問題。如果您的實(shí)驗(yàn)對(duì)血管發(fā)育本身非常敏感，這一點(diǎn)尤其重要。
結(jié)論與建議
可以用的前提是驗(yàn)證：是的，CDH5-ert2 Cre 鼠的純合子絕大多數(shù)情況下是可以用的。?但在您自己的實(shí)驗(yàn)體系中，必須通過與報(bào)告基因鼠交配，來實(shí)際驗(yàn)證其重組效率和特異性是否滿足您的要求。
查閱原始資料：優(yōu)先參考您實(shí)驗(yàn)室或合作者之前使用該品系的經(jīng)驗(yàn)，或直接查詢Jackson Lab等供應(yīng)商對(duì)該品系（Stock Number）的詳細(xì)說明。
設(shè)計(jì)交配策略：如果您計(jì)劃長期使用，為了簡化后續(xù)的基因型鑒定，培育一個(gè)?Cre 純合 + 報(bào)告基因純合?的“萬能”配偶鼠群是一個(gè)非常高效的選擇。
總結(jié)：放心地用純合子做實(shí)驗(yàn)，但在此之前，請(qǐng)務(wù)必花一點(diǎn)時(shí)間和少量動(dòng)物，做一個(gè)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)尿?yàn)證實(shí)驗(yàn)。這是確保您后續(xù)所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠性的基石。
