遺傳轉化－葉盤法

預培養(yǎng)：選取5葉期本氏煙生長較肥厚的葉片，用無菌水沖洗數(shù)遍后，用70 %乙醇表面消毒1min，25%的次氯酸鈉消毒2-3min，再用無菌水沖洗數(shù)遍，無菌濾紙吸干表面水分，再用手術刀切成1cm2小塊，置于含有6-BA(2 mg/L)的MS培養(yǎng)基上進行預培養(yǎng)2-3d。

共培養(yǎng)：菌體用100ml MS+200μl AS(100μg/ml)重新懸浮30min，取出預培養(yǎng)后的煙草葉片，放入MS懸浮后的農(nóng)桿菌液中浸泡約10min，并不間斷的輕輕晃動，之后取出葉片置于無菌濾紙上吸干，放入含有6-BA

(3mg/L)、NAA(0.2 mg/L)、AS(100μM)的共培養(yǎng)的培養(yǎng)基上26℃暗培養(yǎng)2-3d。

篩選培養(yǎng)：將共培養(yǎng)后的葉片取出，用無菌水清洗數(shù)遍，無菌濾紙吸干殘余的水分，至于含抗生素(Carb和Hyb)的MS篩選培養(yǎng)基上進行選擇培養(yǎng)，每兩周篩選培養(yǎng)一次。

生根培養(yǎng)：待小芽長到1cm以上時，切去芽基部的愈傷組織，轉移到含有(Carb和Hyb)的1/2MS生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)。

待幼苗生根后，輕輕拔出，洗去根部的瓊脂，移栽到土壤中，先在陰暗處練苗1-2d使其適應外界環(huán)境后再轉移到正常環(huán)境下光照培養(yǎng)。