人乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)細(xì)胞培養(yǎng)要點(diǎn)

MCF細(xì)胞是從一名69歲白人女性乳腺癌患者的胸腔積液中分離建立,常用于研究乳腺癌發(fā)病機(jī)理的研究,MCF-7屬于貼壁細(xì)胞,顯微鏡下呈現(xiàn)上皮細(xì)胞形態(tài),且保留了分化乳腺上皮的許多特性。包括:能通過(guò)胞質(zhì)雌 激素受體加工雌二醇并能形成圓形復(fù)合物(domes)。該細(xì)胞含有 WNT7B 癌基因。腫瘤壞死因子α(TNF alpha)可以抑制 MCF-7 細(xì)胞生長(zhǎng)。細(xì)胞經(jīng)抗雌激素處理后能調(diào)節(jié) 胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白 IGFBPS 分泌。

MCF-7常用DMEM培養(yǎng)基,含10%胎牛血清,在37℃、5%二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng),MCF-7是一種生長(zhǎng)緩慢的細(xì)胞系,它會(huì)以松散的三維團(tuán)簇的形式出現(xiàn),并伴有一些漂浮的活細(xì)胞。懸浮的活細(xì)胞可以通過(guò)離心后重新加入到培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。在復(fù)蘇后前二代 該細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)貼壁緩慢的情況,是正?,F(xiàn)象。松散的三維團(tuán)簇細(xì)胞慢慢會(huì)擴(kuò)散形成一個(gè) 扁平的單層細(xì)胞。

細(xì)胞名稱:人乳腺癌細(xì)胞(STR鑒定正確)

細(xì)胞簡(jiǎn)稱:MCF-7

產(chǎn)品貨號(hào):TCH-C247

種屬來(lái)源:

組織來(lái)源:乳腺

疾病特征:乳腺癌

細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣

生長(zhǎng)特性:貼壁生長(zhǎng)

培養(yǎng)體系:MEM+10%FBS+1%Glutamax+1%NEAA+1% Sodium Pyruvate+10 μg/mL Human recombinant insulin+1%P/S

配套培養(yǎng)基貨號(hào):TCH-G247

傳代比例:1:3-1:6,每2-3天換液一次

傳代周期:48-72 h

培養(yǎng)條件:氣相:95%空氣+5%CO2,溫度:37℃

凍存條件:60%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+30%FBS+10%DMSO,液氮儲(chǔ)存

質(zhì)量檢測(cè):細(xì)菌、真菌、支原體檢測(cè)均為陰性

MCF-7細(xì)胞的傳代

1. 盡量吸干凈培養(yǎng)瓶瓶或培養(yǎng)皿原培養(yǎng)基;

2. 加2-3ml 常溫PBS輕輕潤(rùn)洗細(xì)胞,吸走潤(rùn)洗的PBS;

3. 培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中加適量胰酶使其正好鋪勻瓶底;例如:10cm培養(yǎng)皿一般加入2ml 胰酶,輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶以使胰酶鋪勻瓶底細(xì)胞層;

4. 將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化;

5. 消化到細(xì)胞間隙變大,但未完全脫落時(shí)加入為胰酶2倍體積完全培養(yǎng)基終止胰酶消化;

6. 混勻細(xì)胞,貼壁細(xì)胞1100rpm離心4min,棄上清;

7. 加新的完全培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞,均勻分到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿里;

8. 補(bǔ)足完全培養(yǎng)基,將細(xì)胞放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng).

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