第4策 分子點睛（進入變量環(huán)節(jié)）
如何證明分子介導表型？
上調(diào)，gain of function; 過表達， over-expression；兩種方法：質粒（轉染 transfection，常用轉染試劑是脂質體；電轉、鈣轉；transduction, 轉導；transformation，轉化；infection，感染）、病毒。
下調(diào)，loss of function (RNAi技術，合成一段21個堿基的siRNA, 轉染到細胞里就能對目標基因實現(xiàn)70%以上的表達沉默；RNAi沉默基因，稱為knockdown，即敲降或敲減)
lncRNA什么都可以干;
miRNA;
circRNA;
競爭性內(nèi)源RNA（ceRNA）
第5策 引藥生變
第4策回顧：分子包括DNA、RNA、蛋白質等。
做實驗實際上是一個猜想、驗證、再猜想、再驗證的過程。
第二個變量：藥物
藥物為什么有效？
新藥發(fā)現(xiàn)
靈感來源：臨床中對于老藥其他作用的細致觀察；文獻報告。
- 藥物分類
化學藥物，中藥、天然藥物，生物制品。
中藥主要研究有效部位、有效成分、 - 藥物為什么有效：尋找藥物的作用靶點（即分子機制研究）；
研究套路：藥物+通路，藥物+分子
老藥新用
- 新藥找靶點，老藥做耐藥（藥物敏感/耐藥人群在分子上的篩選 ）
藥物為什么沒效？
耐藥發(fā)生
- 基因性耐藥，即原發(fā)性耐藥。
- 表觀性耐藥，即繼發(fā)性耐藥，獲得性耐藥。
耐藥逆轉
- 研究思路類似于耐藥機制。
第6策 通路圓滿
（即通路 pathway, signaling pathway;信號轉導 signal consduction）
只要是信息從一個分子傳到另一個分子，就可以稱為通路，可以看作多個分子組成的團隊。
基礎科研三變量
藥物、分子、通路。
細胞信號通路
- 細胞接受三類信號：物理信號、化學信號、生物信號。
- 生物信號包括：激素、神經(jīng)遞質和細胞因子。
- 信號通路的三大組成元件：配體和受體、蛋白激酶、轉錄因子。
crosstalk 交互作用 - 熟記明星通路：NF-κB, PI3K-AKT, MAPK, JAK-STAT, TGF-β, Wnt, Notch, Hedgehog, Hippo.
- 通路的命名：
1.以分子名稱命名通路（具有百搭屬性，需重點關注）；
2.以表型名稱命名通路。 - 需掌握通路介紹：
- NF-κB通路：NF-κB（nuclear factor-kappa B） 是 1986 年從 B 淋巴細胞的細胞核抽提物中找到的轉錄因子，屬于通路里的老大哥。
明星分子：p65, p50, IKK, IκB等。 - PI3K-AKT通路：PI3K 是一種胞內(nèi)的磷脂酰肌醇激酶， 具有絲氨酸/蘇氨酸激酶的活性，調(diào)節(jié)細胞的增殖、分化、凋亡和遷移。
明星分子：mTOR（哺乳動物雷帕霉素靶蛋白）、 HIF1α、 c-Myc、 FoxO等。 - MAPK通路：絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase， MAPK）。
明星分子：ERK、 JNK、 p38MAPK 和 ERK5等。 - JAK-STAT通路：跟細胞的增殖、 分化、 凋亡都有關系。由三個部分組成： 接收信號的酪氨酸激酶相關受體、 傳遞信號的酪氨酸激酶 JAK 和產(chǎn)生效應的轉錄因子 STAT。
- TGF-β通路：TGF 是轉化生長因子（transforming growth factor），TGF-β信號通路經(jīng)常會稱為 TGF-β/SMAD信號通路。
- Wnt 信號通路：Wnt 是一類分泌型糖蛋白， 通過自分泌或旁分泌發(fā)揮作用。
明星分子：β-Catenin。 - Notch 信號通路：Notch的受體和配體都是膜蛋白，它介導的是兩個細胞相互靠近接觸之后的活化效應。
- Hedgehog 信號通路：Wnt、 Notch 經(jīng)常和 Hedgehog 放在一起說，這三條通路的 cross-talk 非常密切。
- Hippo 信號通路：Hippo 是信號通路中的新寵。Hippo 跟 Notch、 Wnt、 MAPK 都有交集。
明星分子：YAP 和 TAZ。
