一、支原體污染

識別支原體污染。這是一種很難發(fā)現(xiàn)卻經(jīng)常存在的問題。支原體是最小的(0. 3μ.m)能夠自我復(fù)制的有機(jī)體，倒置顯微鏡下通常觀察不到。支原體沒有細(xì)胞壁，對常用的抗生素不敏感。支原體感染是極為不易察覺的，可能直到出現(xiàn)了可以觀察到的病變或發(fā)現(xiàn)細(xì)胞正常功能喪失的時(shí)候，才意識到是發(fā)生了支原體感染。

不采用特殊的染色方法，也沒有觀察到病變但是實(shí)驗(yàn)總是不成功，就應(yīng)懷疑被支原體污染。預(yù)防支原體污染的唯一途徑是經(jīng)常對細(xì)胞進(jìn)行篩選。

防止支原體感染。只使用那些證明沒有污染支原體的血清和培養(yǎng)基，許多公司都作出了這樣的保證。只接受那些保證沒有支原體感染的細(xì)胞，通過商業(yè)手段得到的細(xì)胞很容易做到，但是從別處索要時(shí)就一定注意，要直接詢問他是否驗(yàn)證過沒有支原體感染。

對細(xì)胞進(jìn)行日常的篩選是很重要的。雖然這樣做很麻煩，但當(dāng)你怎么樣也得不到一種細(xì)胞表面蛋白的抗體，或不能有效地表達(dá)某種蛋白質(zhì)時(shí)，可能是由于一直在使用被支原體感染的細(xì)胞。

檢測支原體感染。如果這株細(xì)胞對你十分重要，那么就應(yīng)該每4~6 周對細(xì)胞進(jìn)行檢測，通常使用下面幾種方法：

支原體的熒光染色是最簡單、最便宜也是最常用的方法。

使用支原體的特異引物進(jìn)行PCR 檢測。如果實(shí)驗(yàn)室具備PCR 儀和電泳條件，那么這種方法可能是最簡單的手段?？梢宰约涸O(shè)計(jì)引物（設(shè)計(jì)好恰當(dāng)?shù)膶φ眨?，也可以從公司購買引物。

把細(xì)胞樣品送到能進(jìn)行支原體檢測的公司檢測。這樣做雖不如自己檢測快（盡管托給公司比較容易，但會很貴），但你不需要自己動手。

如果你發(fā)現(xiàn)了支原體污染……祝你好運(yùn)！

最好的方法是立即把細(xì)胞丟棄，重新復(fù)蘇。

可以不理會它。

可以采取某些挽救措施，但是會很困難，只適用于那些不可代替的細(xì)胞。最簡單的方法是訂購除去支原體的試劑盒，并且聯(lián)系公司咨詢他們的意見。

二、交叉污染

細(xì)胞還可能被別的細(xì)胞污染，這種交叉污染可能更廣泛，許多實(shí)驗(yàn)人員在不經(jīng)意之間培養(yǎng)、使用和凍存了其他的細(xì)胞。

這種污染是可以避免的。

只從有保障的地方得到細(xì)胞，或者自己檢查細(xì)胞，許多公司也可以檢查。

不要同時(shí)操作多株細(xì)胞。不要把多種培養(yǎng)瓶同時(shí)放在超凈臺內(nèi)。

不要使用同一個(gè)移液管操作多種細(xì)胞。

不同細(xì)胞株不要使用同一瓶培養(yǎng)基或胰蛋白酶。

操作后不要把移液管放回培養(yǎng)基的瓶中。

培養(yǎng)維護(hù)時(shí)，使用栓塞式移液管。

如果你的細(xì)胞生長情況或功能突然發(fā)生了變化，在排除支原體污染后，檢查你的細(xì)胞是否發(fā)生了交叉污染（這些變化也可能是發(fā)生了突變或漂變） 。