? ? ? 在上篇概述中，我們講到了循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTC）的特點(diǎn)以及臨床應(yīng)用。我們了解到只需抽取幾管血液就能檢測(cè)我們體內(nèi)的健康狀況，那么血液中的CTC是如何與其他血細(xì)胞分離開的呢？用的是什么技術(shù)和原理呢？跟著我一起抓緊來(lái)學(xué)習(xí)一下吧。

? ? ? 最重要的是CTC的檢測(cè)平臺(tái)。平臺(tái)必須是可靠的、可重復(fù)的，且是迅速的、經(jīng)濟(jì)有效的，適合于大規(guī)模的生產(chǎn)和使用。

? ? ? 目前，捕獲CTC的技術(shù)主要是分為體內(nèi)和體外兩大類。體內(nèi)的技術(shù)主要是將捕獲裝置放置于血管中。國(guó)外有相應(yīng)的此類技術(shù)和設(shè)備。國(guó)內(nèi)應(yīng)用普遍的就是體外類技術(shù)，即抽取7-10ml的血液去檢測(cè)CTC。

? ? ? 體外類技術(shù)也分為兩類：不捕獲直接檢測(cè)和先捕獲后檢測(cè)。不捕獲直接檢測(cè)就是指直接涂片，此類方法應(yīng)用較少。應(yīng)用最普遍的就是先捕獲CTC然后再進(jìn)行檢測(cè)。此類方法根據(jù)捕獲方法的不同也分為很多種，今天主要講解最常用的幾種。

? ? ? 第一種：依據(jù)血液中細(xì)胞的大小來(lái)捕獲CTC。血液中主要有紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板和CTC。CTC是來(lái)源于腫瘤組織的，其細(xì)胞大于其他種類的細(xì)胞，所以可以依據(jù)細(xì)胞大小來(lái)捕獲CTC。一種是直接過(guò)濾分離。一種是密度梯度離心，在分離介質(zhì)下，不同大小的細(xì)胞會(huì)離心至不同的部位。

? ? ? ? 第二種：基于免疫親和力的捕獲方法。上皮細(xì)胞來(lái)源的腫瘤釋放入血的CTC表面仍表達(dá)有上皮細(xì)胞特異的表面分子如EpCAM（上皮細(xì)胞黏附分子），針對(duì)這種分子制備的抗體可以用來(lái)吸附CTC，這是免疫方法的原理。這種方法是比較多樣的，我們主要講解四種。

? ? ? ? 1、免疫磁分離：是一種基于MagSweeper平臺(tái)的免疫磁富集技術(shù)，與其他的分離技術(shù)相比，有相對(duì)高的細(xì)胞純度，不僅能加工處理全血，且不經(jīng)過(guò)離心或紅細(xì)胞裂解。血液樣品事先與抗體包被的磁珠混合，機(jī)器控制的磁棒會(huì)以一定的速率掃描樣品孔，確保分離吸附的非磁性標(biāo)記細(xì)胞，達(dá)到隔離CTCs的目的。

? ? ? MagSweeper平臺(tái)處理血液的速率是9mL每小時(shí)。用單個(gè)自動(dòng)化系統(tǒng)控制的磁棒陣列，該系統(tǒng)可以很容易的擴(kuò)展來(lái)處理多個(gè)樣本。這里要分陽(yáng)性選擇和陰性選擇，前者是指磁珠吸附的是表達(dá)有特異上皮細(xì)胞表面抗原的CTC，而后者是指磁珠通過(guò)包被針對(duì)上皮細(xì)胞不表達(dá)的表面抗原的抗體來(lái)吸附移除背景細(xì)胞。但是，由于CTCs表達(dá)的表面標(biāo)志物的異構(gòu)性，到目前不可能發(fā)現(xiàn)一個(gè)普遍的CTC特定抗原。因此只能通過(guò)將磁珠包被多種抗體來(lái)更準(zhǔn)確地分離CTCs。以親和力為基礎(chǔ)的捕獲方法使用的抗原目錄還包括干細(xì)胞標(biāo)志物CD133，間充質(zhì)標(biāo)志物（細(xì)胞表面波形蛋白，CSV），腫瘤特異抗原（HER2,PSMA）等等。

? ? ? 第二、第三、第四種方法分別是磁流納米粒子、微柱陣列和表面捕獲微流控。我們將放到下次講解，歡迎關(guān)注后續(xù)。

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