在做qPCR的時候，40個循環(huán)之后，都會插入一步（6）：繪制溶解曲線。
Fig1.PNG
結束以后會出現下面的結果
Fig2.PNG
RFU為熒光單位，隨著溫度的升高，熒光值一直在下降，表明DNA雙鏈在變性成為單鏈，但是下降速率卻是不一樣的，如綠色的線大概在85°后下降變快，藍色和紅色的線卻在85°前下降變快，求它的導數(-d(RFU)/dT)即為對應的下降速率，如下圖：
Fig3.PNG
那么，溶解峰會給我們提供什么信息呢？
上圖的三種顏色代表了我三種不同的PCR產物片段（3個基因）
從左至右依次（產物名稱，產物大小，GC含量，GC堿基對）：
A(藍色)，141bp，59%，84
B(紅色)，138bp，61%，85
C(綠色)，169bp，58%，99
結果會發(fā)現，溶解溫度與產物的含有的GC堿基對數是正相關的（應該不是線性相關）
如果三個產物的GC含量一樣，那么就可以大致判斷，A<B<C,對應的他們的GC堿基對數：A<B<C
溶解峰單一表明PCR產物特異性好，
最大峰處對應的溫度為PCR產物（不是引物）的Tm值，此時產物DNA片段一半為雙鏈，一半為單鏈。
此外，PCR形成的引物二聚體溶解峰會在低于80°出現（分子量小）。
