隨著噬菌體抗體庫的應用范圍不斷擴大，可用于篩選抗體的抗原形式也是多樣發(fā)展的，可以是病理切片、完整的細胞，甚至是活體動物的器官。經(jīng)文庫篩選所得抗體的特異性和親和力可以進行優(yōu)化和調節(jié)。使用該技術不僅可以有效避開免疫過程中獲得的特異性人源抗體，還能克服單克隆抗體制備效率低、雜交瘤體外培養(yǎng)穩(wěn)定性差、方法耗時耗力等缺點。
一．固相篩選的原理
固相篩選是將抗原包被于固相有機介質（例如酶標板、有機膜或免疫管）上，通過將抗原與抗體庫共同孵育，特異性噬菌體抗體可以與抗原結合。該方法簡單，技術成熟，比較容易獲得高親和力的抗體，篩選的效率與靶抗原的純度相關。而液相篩選方法主要是將生物素化的抗原涂覆在與抗生物素偶聯(lián)的磁珠上，然后使用噬菌體文庫進行多輪篩選。
二．固相篩選步驟：
（1）用50mmol/L碳酸氫鈉緩沖液（pH 10.0）稀釋抗原，用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）板包被，每孔100μL，于4℃放置過夜
（2）次日用PBS/5%牛奶密封1小時，將其投入至噬菌體文庫，37℃孵育2小時，用PBS/0.05%吐溫（PBST）洗滌6次，并向每個孔中加入200μL洗脫緩沖液洗脫結合的噬菌體，然后用2mol/L Tris-HCl中和。
（3）測量噬菌體滴度并擴增，用于下一輪篩選。遵循“吸附-洗脫-擴增”方法，共進行了3輪洗脫，隨后的2輪篩選逐漸減少了抗原包被的量，使特異性噬菌體高度富集。
三．固相篩選的優(yōu)勢
（1）不經(jīng)過體內免疫即可獲得抗體，篩選的標靶可以是任何抗原，易于親和力成熟及結構改造。
（2）噬菌體抗體庫是基因型和表型的統(tǒng)一，同時又能將抗體選擇能力和噬菌體的擴增能力進行組合，是一種極其有效的篩選系統(tǒng)。
四．固相篩選的常用策略
表位篩選：表位（Epitope）是抗原表面的一段決定位點，該位點的主要功能是決定抗原與抗體的結合特點和折疊狀態(tài)。它既可以是抗原一級結構中一段連續(xù)的氨基酸殘基，即線性表位，也可以是不連續(xù)的，但卻包含有結合受體所必需的某些氨基酸，即構象表位。由于空間表位難以模擬，對于一些不容易純化得到的受體，可針對受體胞外區(qū)的一段已知線性表位進行純化，這樣要比純化全長膜受體要容易得多，或者直接化學合成的線性中和多肽。
五．細胞篩選的實驗流程
泰克生物具有完善的上下游對接服務，包括抗原、抗體的表達純化、抗體人源化、重組抗體表達等服務。在文庫構建方面具有成熟穩(wěn)定的技術，噬菌體展示技術提供1級免疫文庫的建庫庫容為10^8-10^9，插入率均滿足>95%，篩選獲得的抗體親和力普遍處于nM-pM級別。具備多種篩選體系，包括直接篩選法、競爭法、負篩選法、細胞篩選法等，可提供VHH篩選、scFv序列篩選、Fab抗體篩選等，滿足不同客戶的不同需求。產(chǎn)品交付標準高：針對免疫庫，交付免疫前后血清，抗體展示文庫，篩選洗脫產(chǎn)物，CDR區(qū)域補充度的納米抗體序列，QC質控標準（含RNA提取，cDNA制備等）。
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