一、產品概述
由艾美捷代理的Abnova推出的8-OHdG monoclonal antibody(克隆號:OHdG F5,貨號:MAB6116)是一款小鼠來源的單克隆抗體,以 8-羥基-2‘-脫氧鳥苷(8-OHdG)與 KLH 的偶聯(lián)物為免疫原制備而成。該抗體適用于免疫組織化學(IHC)檢測,主要用于研究用途(RUO),不可用于臨床診斷。
8-OHdG 是氧化性 DNA 損傷的經典生物標志物,由活性氧自由基攻擊 DNA 中的脫氧鳥苷產生。該抗體能夠特異性識別并捕獲樣本中的 8-OHdG,為氧化應激相關研究(如環(huán)境毒理學、癌癥、神經退行性疾病、衰老等)提供可靠的免疫檢測工具。
二、產品規(guī)格與基本信息
項目 具體信息
克隆名稱 OHdG F5
宿主 小鼠
亞型 IgG1, kappa
免疫原 8-OHdG 與 KLH 偶聯(lián)物
形式 凍干粉
緩沖體系 凍干前為 50 mM PBS,pH 7.4,含 1.0% BSA
應用 免疫組織化學(IHC)
推薦使用濃度 IHC:5–10 μg/mL IgG(具體需使用者優(yōu)化)
儲存條件 干態(tài):< -20°C,干燥環(huán)境;復溶后:-20°C 或更低,分裝保存,避免反復凍融
三、特異性優(yōu)勢:超低交叉反應
本抗體最顯著的功能優(yōu)勢在于其極高的特異性。生產方針對 19 種 8-OHdG 類似物 進行了系統(tǒng)的交叉反應驗證,結果如下:
3.1 無交叉反應的類似物(共 15 種)
以下類似物與抗體無任何交叉反應:
鳥苷(G)
7-甲基鳥苷(7-methyl-G)
6-巰基鳥苷(6-SH-G)
8-溴鳥苷(8-bromo-G)
脫氧腺苷(dA)
脫氧胞苷(dC)
脫氧胸苷(dT)
脫氧肌苷(dI)
脫氧尿苷(dU)
脫氧鳥苷(dG)
O6-甲基脫氧鳥苷(O6-methyl-dG)
8-羥基脫氧腺苷(8-OHdA)
鳥嘌呤(Gua)
O6-甲基鳥嘌呤(O6-methyl-Gua)
尿酸、尿素、肌酸、肌酐
3.2 存在微弱交叉反應的類似物(< 1%)
以下兩種類似物表現出極微弱的交叉反應(均低于 1%),在實際應用中可視為可忽略不計:
8-巰基鳥苷(8-sulfhydryl-G)
8-羥基鳥嘌呤(8-OHGua)
結論:該抗體對 8-OHdG 具有高度專一性,能夠有效區(qū)分 8-OHdG 與其結構相近的氧化嘌呤產物及其他核苷/堿基類似物。這一特性顯著降低了免疫染色中假陽性信號的干擾,尤其適用于組織切片中低豐度 8-OHdG 的原位檢測。
四、應用說明
4.1 主要應用:免疫組織化學(IHC)
本抗體已驗證適用于 IHC 檢測,可用于福爾馬林固定、石蠟包埋組織切片或冰凍切片中 8-OHdG 的定位與半定量分析。推薦起始濃度為 5–10 μg/mL IgG,但最佳工作濃度可能因組織類型、固定條件、抗原修復方法及檢測系統(tǒng)而異,需由使用者通過預實驗梯度稀釋確定。
4.2 未驗證的應用
本產品目前僅針對 IHC 進行了驗證。如需用于 ELISA、Western blot、免疫熒光或其他檢測體系,使用者需自行評估其適用性。
五、操作與儲存指南
5.1 凍干粉復溶
使用無菌蒸餾水復溶。具體體積請參照產品標簽或隨附說明書,通常建議復溶至適當濃度(如 0.5 mg/mL 或 1 mg/mL)。
復溶后應輕柔混勻,避免劇烈震蕩產生氣泡。
5.2 儲存條件
凍干狀態(tài):在 < -20°C 干燥環(huán)境中儲存,可長期穩(wěn)定。
復溶后:應分裝成單次使用量,儲存于 -20°C 或更低溫度。嚴禁反復凍融,否則可能導致抗體活性下降。
建議:將未稀釋的復溶液分裝于微量離心管中,每管用量足夠一次實驗即可。取用一管后剩余部分不應再次冷凍。
5.3 穩(wěn)定性提示
抗體在推薦的儲存條件下可保持穩(wěn)定。避免暴露于高溫、光照或微生物污染。如發(fā)現復溶后出現沉淀或渾濁,建議離心去除顆粒物后再使用。
六、功能優(yōu)勢總結
1. 超高特異性:經 19 種類似物驗證,僅兩種存在 < 1% 的微弱交叉,確保 IHC 染色結果的真實性。
2. 小鼠單克?。号伍g一致性高,可重復性好。
3. 凍干粉形式:便于運輸與長期儲存,復溶后活性穩(wěn)定。
4. 即用型濃度指導:提供明確的 IHC 濃度范圍(5–10 μg/mL),減少摸索時間。
5. 適用廣泛:可檢測多種生物樣本(細胞、新鮮/冷凍組織、石蠟包埋組織)中的 8-OHdG。
七、研究應用場景舉例
環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學:檢測暴露于 PM2.5、重金屬、農藥等污染物后動物或人體組織中的氧化性DNA損傷。
放射生物學:評估電離輻射或紫外線照射后皮膚、造血組織等靶器官中 8-OHdG 的蓄積。
腫瘤病理學:分析癌前病變及惡性腫瘤中氧化應激水平,探討 8-OHdG 與突變負荷的關系。
神經科學:在阿爾茨海默病、帕金森病模型中定位神經元 DNA 氧化損傷的分布。
心血管研究:檢測動脈粥樣硬化斑塊或心肌缺血再灌注損傷區(qū)域中 8-OHdG 的表達。
八、注意事項
1. 研究用途限制:本產品僅限科研使用,不得用于人類或動物的診斷或治療。
2. 優(yōu)化必要性:建議使用者對每種新的組織類型進行抗體稀釋梯度實驗(如 2.5、5、10、20 μg/mL),并設置適當的陰性對照(如同型對照抗體或抗原預吸收對照)。
3. 抗原修復:對于石蠟包埋組織,通常需要進行熱誘導抗原修復(如檸檬酸緩沖液微波修復),以暴露 8-OHdG 表位。具體修復條件需自行優(yōu)化。
4. 防腐劑:本產品不含疊氮化鈉(凍干緩沖液為 PBS/BSA),復溶時可酌情添加 0.02–0.05% 疊氮化鈉用于短期保存(但若用于 IHC 染色,注意疊氮化鈉會抑制 HRP 活性,應避免或徹底透析去除)。
文獻參考:
1. Asymmetrical arginine dimethylation of histone H4 by 8-oxog/OGG1/PRMT1 is essential for oxidative stressinduced transcription activation. Wentao Wang, Ying Ma,Miaoling Huang, Weichu Liang, Xingqi Zhao, Qianwen Li, Shiwei Wang, Zhigang Hu, Lingfeng He, Tao Gao,Jinfei Chen, Feiyan Pan, Zhigang Guo. Free Radic Biol Med. 2021 Feb 20;164:175-186.
doi:10.1016/j.freeradbiomed.2020.12.457. Epub 2021 Jan 6.
2. SUMO2 regulates vascular endothelial function and oxidative stress in mice. Kim YR, Jacobs JS, Li Q,Gaddam RR, Vikram A, Liu J, Kassan M, Irani K, Kumar S. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2019 Dec 1;317(6):H1292-H1300.
doi:10.1152/ajpheart.00530.2019. Epub 2019 Oct 4.
3. Protection against pyrimidine dimers, p53, and 8-hydroxy-2'-deoxyguanosine expression in ultravioletirradiated human skin by sunscreens: difference between UVB + UVA and UVB alone sunscreens. Liardet S, Scaletta C, Panizzon R, Hohlfeld P, LaurentApplegate L. J Invest Dermatol. 2001
Dec;117(6):1437-41.